BspQI
BspQI ສາມາດຖືກສະແດງອອກຄືນໃຫມ່ໃນ E. coli ທີ່ສາມາດຮັບຮູ້ສະຖານທີ່ສະເພາະແລະຖືກຜະລິດພາຍໃຕ້.
BspQI, ການຈຳກັດ endonuclease ຂອງ endonuclease ຂອງ IIs, ແມ່ນມາຈາກສາຍພັນ E. coli ທີ່ປະສົມພັນທີ່ບັນຈຸ BspQI gen ທີ່ຖືກໂຄນແລະຖືກດັດແປງຈາກ Bacillus sphaericus.ມັນສາມາດຮັບຮູ້ສະຖານທີ່ສະເພາະ, ແລະລໍາດັບການຮັບຮູ້ແລະສະຖານທີ່ cleavage ມີດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
.
3'
ຄຸນສົມບັດຜະລິດຕະພັນ
1. ກິດຈະກໍາສູງ, ການຍ່ອຍອາຫານໄວ;
2. ກິດຈະກໍາດາວຕ່ໍາ, ຮັບປະກັນການຕັດທີ່ຖືກຕ້ອງເຊັ່ນ "scalpel";
3. ບໍ່ມີ BSA ແລະສັດ-ຕົ້ນກໍາເນີດຟຣີ;
ຄວາມອ່ອນໄຫວ Methylation
Dam methylation:ບໍ່ລະອຽດອ່ອນ;
Dຊຕມ methylation:ບໍ່ລະອຽດອ່ອນ;
CpG Methylation:ບໍ່ລະອຽດອ່ອນ;
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ຜະລິດຕະພັນຄວນຈະຖືກຈັດສົ່ງ ≤ 0 ℃;ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນສະພາບ -25 ~ - 15 ℃.
ພື້ນທີ່ເກັບຂໍ້ມູນ
20mM Tris-HCl, 0.1mM EDTA, 500 mM KCl, 1.0 mM dithiothreitol, 500 µg/ml Recombinant Albumin, 0. 1% Trition X-100 ແລະ 50% glycerol (pH 7.0 @ 25°C).
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນ enzyme ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອຍ່ອຍ 1µg ຂອງ DNA ຄວບຄຸມພາຍໃນໃນ 1 ຊົ່ວໂມງທີ່ 50 ° C ໃນປະລິມານຕິກິຣິຍາທັງຫມົດ 50 µL.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
ການທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດຂອງທາດໂປຼຕີນ (SDS-PAGE):ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ BspQI ແມ່ນ ≥95% ຖືກກໍານົດໂດຍການວິເຄາະ SDS-PAGE.
RNase:10U ຂອງ BspQI ກັບ 1.6μg MS2 RNA ສໍາລັບ 4 ຊົ່ວໂມງທີ່ 50 ℃ yields ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຕາມກໍານົດໂດຍ agarose gel electrophoresis.
ກິດຈະກໍາ DNase ທີ່ບໍ່ສະເພາະ:10U ຂອງ BspQI ທີ່ມີ 1μg λ DNA ທີ່ 50 ℃ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງ, ເມື່ອທຽບກັບ 50 ℃ສໍາລັບ 1 ຊົ່ວໂມງ, ຜົນຜະລິດບໍ່ມີ DNA ເກີນຕາມທີ່ກໍານົດໂດຍ agarose gel electrophoresis.
ການຕັດສາຍພັນແລະການຕັດອອກ:ຫຼັງຈາກການຍ່ອຍອາຫານຂອງ 1 μg λDNA ກັບ 10U BspQI, ຊິ້ນ DNA ສາມາດຖືກຜູກມັດດ້ວຍ T4 DNA ligase ຢູ່ທີ່ 16ºC.ແລະຊິ້ນສ່ວນທີ່ຜູກມັດເຫຼົ່ານີ້ສາມາດຖືກຕັດດ້ວຍ BspQI.
E. coli DNA: ການກວດຫາ E. coli 16s rDNA-specific TaqMan qPCR ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ E.coli genome residue ≤ 0.1pg/ul.
ທາດໂປຼຕີນຈາກເຈົ້າພາບ:≤ 50 ppm
ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ Endotoxin: LAL-test, ອີງຕາມການຈີນ Pharmacopoeia IV 2020 edition, gel limit test method, general rule (1143).ປະລິມານ endotoxin ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຄວນຈະເປັນ ≤10 EU/mg.
ລະບົບປະຕິກິລິຍາແລະເງື່ອນໄຂ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I Buffer | 5 ມລ |
| dd H2O | ສູງເຖິງ 50 μL |
ສະພາບການຕິກິຣິຍາ: 50 ℃, 1~16 ຊົ່ວໂມງ.
inactivated ຄວາມຮ້ອນ: 80°C ສໍາລັບ 20 ນາທີ.
ລະບົບຕິກິຣິຍາທີ່ແນະນໍາແລະເງື່ອນໄຂສາມາດສະຫນອງຜົນກະທົບການຍ່ອຍອາຫານຂອງ enzyme ຂ້ອນຂ້າງດີ, ຊຶ່ງເປັນການອ້າງອິງເທົ່ານັ້ນ, ກະລຸນາເບິ່ງຜົນການທົດລອງສໍາລັບລາຍລະອຽດ.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຜະລິດຕະພັນ
ຈໍາກັດການຍ່ອຍອາຫານ endonuclease, cloning ຢ່າງໄວວາ.
ບັນທຶກ
1. ປະລິມານຂອງ enzyme ≤ 1/10 ຂອງປະລິມານຕິກິຣິຍາ.
2. ກິດຈະກໍາຂອງດາວອາດຈະເກີດຂື້ນເມື່ອຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ glycerol ແມ່ນຫຼາຍກ່ວາ 5%.
3. ກິດຈະກໍາ Cleavage ອາດຈະເກີດຂຶ້ນໃນເວລາທີ່ Substrate ຕ່ໍາກວ່າອັດຕາສ່ວນທີ່ແນະນໍາ.
