Proteinase K (ຜົງ Lyophilized)
ໝາຍເລກແມວ: HC4500A
Proteinase K ແມ່ນ protease serine ທີ່ຫມັ້ນຄົງທີ່ມີຄວາມສະເພາະຂອງ substrate ຢ່າງກວ້າງຂວາງ.ມັນ degrades ທາດໂປຼຕີນຈໍານວນຫຼາຍຢູ່ໃນລັດພື້ນເມືອງເຖິງແມ່ນວ່າຢູ່ໃນທີ່ປະທັບຂອງ detergents.ຫຼັກຖານຈາກການສຶກສາໂຄງປະກອບການໄປເຊຍກັນແລະໂມເລກຸນຊີ້ບອກ enzyme ເປັນຂອງຄອບຄົວ subtilisin ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ catalytic triad (Asp.39- ລາວ69- ເຊີ224).ສະຖານທີ່ເດັ່ນຂອງການແຕກແຍກແມ່ນພັນທະບັດ peptide ຕິດກັບກຸ່ມ carboxyl ຂອງອາຊິດ amino aliphatic ແລະມີກິ່ນຫອມທີ່ມີກຸ່ມ alpha amino ທີ່ຖືກສະກັດ.ມັນຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປສໍາລັບການກວ້າງຂອງມັນສະເພາະ.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
2-8℃ ການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນ, -25~-15℃ ການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ.ສະພາບຝຸ່ນແຫ້ງ -25~-15℃ ສາມາດໃຊ້ໄດ້ 3 ປີ;ຜົງ enzyme ຄວນຖືກລະລາຍເຂົ້າໄປໃນປະລິມານທີ່ເຫມາະສົມ.
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ
| ຮູບລັກສະນະ | ຜົງ lyophilized amorphous ສີຂາວຫາສີຂາວ |
| ກິດຈະກໍາ | ≥30 U/mg |
| ດີນາສ | ບໍ່ກວດພົບ |
| RNase | ບໍ່ກວດພົບ |
ຄຸນສົມບັດ
| ໝາຍເລກ EC | 3.4.21.64 (Recombinant ຈາກອາລະບໍາ Tritirachium) |
| ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ | 29 kDa (SDS-PAGE) |
| ຈຸດ isoelectric | 7.81 |
| pH ທີ່ດີທີ່ສຸດ | 7.0-12.0 Fig.1 |
| ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ | 65 ℃ Fig.2 |
| ສະຖຽນລະພາບ pH | pH 4.5-12.5 (25℃, 16h) Fig.3 |
| ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງຄວາມຮ້ອນ | ຕ່ຳກວ່າ 50℃(pH 8.0, 30min) Fig.4 |
| ຕົວກະຕຸ້ນ | SDS, urea |
| ຢາຍັບຍັ້ງ | Diisopropyl fluorophosphate;phenylmethylsulfonyl fluoride |
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
1. ຊຸດກວດພະຍາດທາງພັນທຸກໍາ
2. ຊຸດສະກັດ RNA ແລະ DNA
3. ການສະກັດເອົາອົງປະກອບທີ່ບໍ່ແມ່ນທາດໂປຼຕີນຈາກເນື້ອເຍື່ອ, ການເຊື່ອມໂຊມຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ impurities, ເຊັ່ນ: ວັກຊີນ DNA ແລະການກະກຽມ heparin.
4. ການກະກຽມຂອງໂຄໂມໂຊມ DNA ໂດຍ electrophoresis pulsed
5. ຕາເວັນຕົກດິນ
6. Enzymatic glycosylated albumin reagents in vitro ການວິນິດໄສ
ການປ້ອງກັນລ່ວງໜ້າ
ໃສ່ຖົງມືແລະແວ່ນຕາປ້ອງກັນໃນເວລາໃຊ້ຫຼືຊັ່ງນໍ້າຫນັກ, ແລະຮັກສາລະບາຍອາກາດໄດ້ດີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້.ຜະລິດຕະພັນນີ້ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດອາການແພ້ຕໍ່ຜິວຫນັງແລະການລະຄາຍເຄືອງຕາທີ່ຮ້າຍແຮງ.ຖ້າຫາຍໃຈເຂົ້າ, ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດອາການແພ້ ຫຼື ອາການຫືດ ຫຼື ຫາຍໃຈຝືດ.ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການລະຄາຍເຄືອງທາງຫາຍໃຈ.
ວິເຄາະ
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງ (U) ຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນ enzyme ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອ hydrolyze casein ເພື່ອຜະລິດ 1 μmol tyrosine ຕໍ່ນາທີພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້.
ການກະກຽມ reagents
Reagent I: casein ນົມ 1g ຖືກລະລາຍໃນ 50ml ຂອງ 0.1M sodium phosphate solution (pH 8.0), incubated in 65-70 ℃ water for 15mins, stirred and dissolved, cooled by water, adjusted by sodium hydroxide to pH 8.0, ແລະປະລິມານຄົງທີ່. 100ml.
Reagent II: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodium acetate, 0.3M ອາຊິດ acetic.
Reagent III: 0.4M Na2CO3ການແກ້ໄຂ.
Reagent IV: Forint reagent diluted with pure water for 5 ເທື່ອ.
Reagent V: enzyme diluent: 0.1M sodium phosphate solution (pH 8.0).
Reagent VI: ການແກ້ໄຂ tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml tyrosine ທີ່ລະລາຍດ້ວຍ 0.2M HCL.
ຂັ້ນຕອນ
1. 0.5ml ຂອງ reagent I ແມ່ນ pre- warmed ກັບ 37℃, ເພີ່ມ 0.5ml ຂອງ enzyme solution, ປົນກັນ, ແລະ incubate ຢູ່ທີ່ 37℃ ສໍາລັບ 10mins.
2. ຕື່ມ 1 ml ຂອງ reagent II ເພື່ອຢຸດຕິກິຣິຍາ, ປົນກັນ, ແລະສືບຕໍ່ incubation ສໍາລັບ 30 ນາທີ.
3. ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ centrifugate.
4. ເອົາ 0.5ml supernatant ຕື່ມ 2.5ml reagent III, 0.5ml reagent IV, ປົນກັນແລະ incubate ທີ່ 37 ℃ 30 ນາທີ.
5. OD660ຖືກກໍານົດເປັນ OD1;ກຸ່ມຄວບຄຸມເປົ່າ: 0.5ml reagent V ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອທົດແທນການແກ້ໄຂ enzyme ເພື່ອກໍານົດ OD660ເປັນ OD2, ΔOD=OD1-OD2.
6. ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ L-tyrosine: 0.5mL ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ L tyrosine solution, 2.5mL Reagent III, 0.5mL Reagent IV in 5mL centrifuge tube, incubate in 37℃ for 30mins, detect for OD660ສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ L-tyrosine ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ Y = kX + b, ບ່ອນທີ່ Y ແມ່ນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ L-tyrosine, X ແມ່ນ OD.600.
ການຄິດໄລ່
2: ປະລິມານທັງໝົດຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ (ມລ)
0.5: ປະລິມານການແກ້ໄຂ enzyme (mL)
0.5: ປະລິມານຂອງແຫຼວປະຕິກິລິຍາທີ່ໃຊ້ໃນການກໍານົດ chromogenic (mL)
10: ເວລາປະຕິກິລິຍາ (ນາທີ)
Df: dilution ຫຼາຍ
C: ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເອນໄຊ (mg/mL)
ເອກະສານອ້າງອີງ
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.ຊີວະປະຫວັດຫຍໍ້.Res.ຊຸມຊົນ.(1971);44:513.
3. Hilz, H.et al.,ເອີ.J. Biochem.(1975);56:103–108.
4. ຊຳບຣຸກ ເຈet al., Molecular Cloning: ຄູ່ມືຫ້ອງທົດລອງ, ສະບັບທີ 2, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).
Fig. 2 ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ
ປະຕິກິລິຍາໃນ 20 mM K-phosphate buffer pH 8.0.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເອນໄຊ: 1mg/ml
ຮູບ 3 pH ສະຖຽນລະພາບ
25 ℃, ການປິ່ນປົວ 16 h ກັບ 50mM buffer solution: pH 4.5-5.5, Acetate;pH 6.0-8.0, Na-phosphate;pH 8.0-9.0, Tris-HCL.pH 9.0-12.5, Glycine-NaOH.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເອນໄຊ: 1mg/ml
Fig. 4 ຄວາມຮ້ອນ ສະຖຽນລະພາບ
ການປິ່ນປົວ 30 ນາທີດ້ວຍ 50mM Tris-HCL buffer, pH 8.0.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເອນໄຊ: 1mg/ml
Fig. 5 ການເກັບຮັກສາ ສະຖຽນລະພາບty at 25℃
