ໂປຣ
ຜະລິດຕະພັນ
ຮູບພາບທີ່ໂດດເດັ່ນ T7 RNA Polymerase HCP1011A
  • T7 RNA Polymerase HCP1011A

T7 RNA Polymerase


ໝາຍເລກແມວ:HCP1011A

ບັນຈຸ: 100μL/1mL/10mL/100mL

T7 RNA Polymerase ແມ່ນ RNA polymerase ທີ່ຂຶ້ນກັບ DNA ຈາກ T7 phage

ລາຍ​ລະ​ອຽດ​ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

ຂໍ້ມູນຜະລິດຕະພັນ

T7 RNA Polymerase ແມ່ນ RNA polymerase ທີ່ຂຶ້ນກັບ DNA ຈາກ T7 phage, ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ເຂັ້ມແຂງແລະສະເພາະ 5´→ 3´ RNA polymerase.T7 RNA Polymerase ມີຄວາມສະເພາະສູງສໍາລັບລໍາດັບສົ່ງເສີມ T7 ແລະຈະສັງເຄາະ RNA ຈໍານວນຫຼວງຫຼາຍຈາກຊິ້ນ DNA. ແຊກລົງລຸ່ມຈາກຜູ້ສົ່ງເສີມ.


  • ທີ່ຜ່ານມາ:
  • ຕໍ່ໄປ:

  • ອົງປະກອບ

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    10×HH T7 Buffer

    ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ

    ການຂົນສົ່ງພາຍໃຕ້ 0 ° C ແລະການເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ -25 ~ - 15 ° C.

    ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ

    ຊື່​ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

    T7 RNA Polymerase

    ລັກສະນະຜະລິດຕະພັນ

    ນ້ຳສະອາດ

     

    ນິຍາມຫົວໜ່ວຍກິດຈະກຳ

    ຫນຶ່ງຫນ່ວຍແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນ enzyme

    ທີ່ຈະກະຕຸ້ນ NTP ໃຫ້ຜະລິດ 1 nmol PPi ໃນ

    1 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ພາຍໃຕ້ລະບົບຕິກິຣິຍາມາດຕະຖານ.

    ພື້ນທີ່ເກັບຂໍ້ມູນ

    50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 20 mM β-M, 1 mM EDTA, 50% Glycerol ,0.1% (w/v)

    Triton® X-100, pH 7.9 @ ​​25°C.

     

    10×HH T7 buffer

    400 mM Tris-HCl (25℃ , pH 8.20), 60 mM

    MgCl2 ,100 mM DTT ,20 mM spermidine.

    ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ

    -25 ~ – 15℃​, ຫຼີກ​ເວັ້ນ​ການ​ຊ​້​ໍ​າ freezing​-thawing​

     

    ປະຕິກິລິຍາແລະເງື່ອນໄຂ

    ປະຕິກິລິຍາແບບ ທຳ ມະດາ

    Reagent

    ຈໍາ​ນວນ

    H2O ທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍ ຫຼື ນ້ຳທີ່ບຳບັດ DEPC

    ສູງເຖິງ 20 μL

    10×HH T7 Buffer

    2 ມລ

    ATP/GTP/CTP/UTP (100 mM ແຕ່ລະອັນ)

    0.4 μLແຕ່ລະຄົນ (2 mMeach Final)

    RNase inhibitor (40 U/μL) (ທາງເລືອກ)

    1 μL (40 U)

    Pyrophosphatase Inorganic (ທາງເລືອກ)

    0.5 μL (0.05U)

    T7 RNA polymerase (50 U/μL)

    1 μL

    ແມ່ແບບ DNA Linearized

    1 μg

    ເພີ່ມອົງປະກອບຕິກິຣິຍາໃນຄໍາສັ່ງຂ້າງເທິງ * 10 × HH T7 Buffer ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບ 2mM NTPs ເທົ່ານັ້ນ, ຊຸດຖອດລະຫັດ T7 ທີ່ມີຜົນຜະລິດສູງອື່ນໆແມ່ນແນະນໍາສໍາລັບ 7.5mM- 10mM NTPs.

    ເວລາອົບ:37 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງ.

    ສະໂຕp ປະຕິກິລິຍາ: ເພີ່ມ 2μL 0.2 M EDTA (pH8.0@25℃) ຫຼືໃຫ້ຄວາມຮ້ອນເຖິງ 75 °C ເປັນເວລາ 10 ນາທີ.

    ການກໍາຈັດ DNA: ແມ່ແບບ DNA ສາມາດເອົາອອກໄດ້ດ້ວຍ 2U DNase I (RNase-free) ແລະ incubation ສໍາລັບ 15 min at 37 °.

     

    ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ

    ກິດຈະກໍາ Endonuclease: Incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50μL ບັນຈຸມີຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ 50U ຂອງ T7 RNAPolymerase ກັບ 1 μg λDNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ຜົນໄດ້ຮັບບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມກໍານົດ.

    ກິດຈະກໍາ Exonuclease: Incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50μL ທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ 50U ຂອງ T7 RNA Polymerase 1 μg λ -Hind Ⅲ ຍ່ອຍ DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມກໍານົດ.

    Nickase ກິດຈະກໍາ: ການຝັງຕິກິຣິຍາ 50μL ທີ່ມີ 50U ຂອງ T7 RNA Polymerase ຕໍາ່ສຸດທີ່ມີ 1μg pBR322 DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມທີ່ໄດ້ກໍານົດ.

    RNase ກິດຈະກໍາ: Incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50μL ທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ 50U ຂອງ T7 RNA Polymerase ກັບ 1.6μg MS2 RNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມກໍານົດ.

    ການກະຕຸ້ນຄວາມຮ້ອນ: 75 °C ເປັນເວລາ 10 ນາທີ.

     

    ລະມັດລະວັງ

    • ປະຕິກິລິຍາການຖອດຂໍ້ຄວາມຄວນຖືກປະຕິບັດໃນສະພາບແວດລ້ອມທີ່ບໍ່ມີການປົນເປື້ອນ RNase.ຄວນໃສ່ຖົງມື.ຄໍາແນະນໍາ, ທໍ່ແລະນ້ໍາຄວນຈະບໍ່ມີນິວເຄລຍ.

    •ຜົນຜະລິດຂອງ RNA ສາມາດປັບປຸງໄດ້ໂດຍການເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ NTP (ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແຕ່ລະຄົນສາມາດບັນລຸ 10mM), ໃນຂະນະທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ Mg2+ ຕ້ອງໄດ້ຮັບການເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງເຫມາະສົມ.

    • ການປະສົມປະຕິກິລິຍາສັງເຄາະ RNA ຄວນຖືກກະກຽມຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ເພາະວ່າ DNA ອາດຈະຕົກຢູ່ໃນທີ່ປະທັບຂອງ 10×HH T7 Buffer ຢູ່ທີ່ 4°C.

    •ຜົນຜະລິດຂອງການຖອດຂໍ້ຄວາມທີ່ມີຄວາມຍາວທີ່ເຫມາະສົມຈະຫຼຸດລົງຖ້າ DNA ຂອງແມ່ແບບແມ່ນ linearized ບໍ່ສົມບູນ.•ສ່ວນປະສົມປະຕິກິລິຍາສາມາດປັບຂະໜາດຂຶ້ນ ຫຼື ລົງ.•ຖ້າຜົນຜະລິດຂອງປະຕິກິລິຢາຫຼຸດລົງ, 20 mM DTT ສົດສາມາດຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນລະບົບຕິກິຣິຍາ.

    • ຊິ້ນສ່ວນທີ່ຖືກຖອດຂໍ້ຄວາມແມ່ນໜ້ອຍກວ່າ ຫຼືເທົ່າກັບ 500bp, ແລະແນະນຳໃຫ້ຂະຫຍາຍເວລາການຖອດຂໍ້ຄວາມອອກເປັນ 4-8 ຊົ່ວໂມງ.

    • Precipitates ແມ່ນງ່າຍທີ່ຈະພົບເຫັນຢູ່ໃນ 10 × HH T7.

    ຂຽນຂໍ້ຄວາມຂອງທ່ານທີ່ນີ້ແລະສົ່ງໃຫ້ພວກເຮົາ