ໂປຣ
ຜະລິດຕະພັນ
N-Glycan Kit HCP0031A ຮູບພາບທີ່ໂດດເດັ່ນ
  • ຊຸດ N-Glycan HCP0031A

ຊຸດ N-Glycan


ໝາຍເລກແມວ: HCP0031A

ການຫຸ້ມຫໍ່: 5T / 24T / 96T

ເອກະສານນີ້ສະຫນອງຂໍ້ມູນກ່ຽວກັບການດູແລທົ່ວໄປແລະການນໍາໃຊ້ N-Glycan Kit ສໍາລັບການປ່ອຍ enzymatic ໄວແລະການຕິດສະຫຼາກຢ່າງໄວວາຂອງ N-glycans.

ລາຍ​ລະ​ອຽດ​ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

ຂໍ້ມູນຜະລິດຕະພັນ

ລາຍ​ລະ​ອຽດ​ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ

ເອກະສານນີ້ສະຫນອງຂໍ້ມູນກ່ຽວກັບການດູແລທົ່ວໄປແລະການນໍາໃຊ້ N-Glycan Kit ສໍາລັບການປ່ອຍ enzymatic ໄວແລະການຕິດສະຫຼາກຢ່າງໄວວາຂອງ N-glycans.ໂປຣໂຕຄໍນີ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ monoclonal antibodies ແລະຍັງໄດ້ຮັບການທົດສອບເພື່ອປະຕິບັດສໍາລັບລະດັບຄວາມກ້ວາງຂອງ glycoproteins N-linked ອື່ນໆ.ພວກເຮົາແນະນໍາໃຫ້ຜູ້ໃຊ້ຢືນຢັນການປ່ອຍ enzymatic ສໍາລັບຕົວຢ່າງສະເພາະຂອງເຂົາເຈົ້າ.


  • ທີ່ຜ່ານມາ:
  • ຕໍ່ໄປ:

  • ອົງປະກອບ

    N-ຊຸດ Glycan (24T)

    ໂມດູນ

    Cອົງປະກອບ

    HCP0031A

     

    ໂມດູນ Deglycosylation

    HCP0031A-1

    IgG

    1.2 ມກ

    PNGase F

    45µL

    PNGase F buffer

    0.5 ມລ

    surfactant

    1.2ມກ*6

    ໂມດູນການຕິດສະຫຼາກ

    HCP0031A-2

    ຝຸ່ນ MS reagent

    8.2ມກ*3

    DMF ບໍ່ມີນ້ໍາ

    1 ມລ

    ໂມດູນເຮັດຄວາມສະອາດ

    HCP0031A-3

    ແຜ່ນ Elution (96well)

    1 ຊິ້ນ

    Elution Buffer

    5 ມລ* 1

    ຕົວ​ຢ່າງ Diluent

    5 ມລ* 1

     

    ໂມດູນການເກັບຕົວຢ່າງ

    HCP0031A-4

    8-tube Strips (200μL)

    100 ຕ່ອນ

    ແຖບ 8-cap

    100 ຕ່ອນ

    ແຜ່ນເກັບ (96well)

    1 ຊິ້ນ

    ຖາດຂີ້ເຫຍື້ອ

    1 ຊິ້ນ

    ພິທີການ

    ຜູ້​ໃຊ້​ຈໍາ​ເປັນ​ຕ້ອງ​ໄດ້​ກະ​ກຽມ reagents ຂ້າງ​ລຸ່ມ​ນີ້​ແລະ​ອຸ​ປະ​ກອນ​ກ່ອນ​ທີ່​ທ່ານ​ຈະ​ເລີ່ມ​ຕົ້ນ (ຫນຶ່ງ​ຕົວ​ຢ່າງ IgG ເປັນ​ຕົວ​ຢ່າງ​):

    (1) 0.85% Nacl, 100µL;acetonitrile (ຊັ້ນ LC-MS) ນ້ໍາ ultrapure;

    (2) 15/85 = ນໍ້າອະສຸຈິ/ອາເຊໂຕໄນໄຕ ການແກ້ໄຂ (v/v), 2 ມລ;1/9/90=ອາຊິດຟໍໂມນ/ນ້ຳອູແກຣນ/ອາເຊໂຕໄນໄຕລ(v/v), 20 ມລ; 50 ມມ ຮູບແບບແອມໂມນຽມ, PH = 4.4 ,500 ມລ;

    (3) ສູບສູນຍາກາດ SPE;ໂຮງງານຜະລິດຄວາມກົດດັນທາງລົບ 96-well-plate ຫຼືໂຮງງານຜະລິດຄວາມກົດດັນໃນທາງບວກ;ໂມດູນຄວາມຮ້ອນຫຼືອາບນ້ໍາໂລຫະ (90 ℃ແລະ 50 ℃);ເຄື່ອງຜະສົມ vortex;pipette.

     

    ຂັ້ນ​ຕອນ​ທີ 1​: Deglycosylation ໄວ​

    (1) ເຈືອຈາງຕົວຢ່າງ IgG ດ້ວຍ 0.85% Nacl ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍຂອງ IgG ທີ່ 2mg/mL.

    (2) PNGase F buffer: ເຈືອຈາງ 1 vial surfactant (1.2mg/3.6mg)ກັບ (24μL/72μL)) PNGase F buffer, ປະສົມແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (ການແກ້ໄຂນີ້ຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ກະກຽມກ່ອນການນໍາໃຊ້).

    (3) ຕື່ມການແກ້ໄຂ 20μL IgG ໃສ່ທໍ່ຕິກິຣິຍາ200μL, ເພີ່ມ 3μL PNGase F buffer , pipette ຂຶ້ນແລະລົງເພື່ອປະສົມແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຕື່ມນ້ໍາ ultrapure 3.3μL, aspirate ແລະ dispense ເພື່ອປະສົມ.

    (4) ຕື່ມການແກ້ໄຂຂ້າງເທິງທັງຫມົດໃຫ້ກັບໂມດູນຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 90 ℃, 3 ນາທີ, denature ມັນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເອົາມັນອອກຈາກໂມດູນຄວາມຮ້ອນ, ແລະເຢັນສໍາລັບ 3 ນາທີຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

    (5) ເພີ່ມ 1.2μL PNGase F, aspirate ແລະ dispense ເພື່ອປະສົມ, ຄວາມຮ້ອນ 50 ℃, 5 ນາທີທີ່ມີໂມດູນຄວາມຮ້ອນ.ຜູ້ໃຊ້ສາມາດກະກຽມການຕິດສະຫຼາກ reagent ໃນຂະນະທີ່ລໍຖ້າ.

    (6) ເອົາມັນອອກຈາກໂມດູນຄວາມຮ້ອນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເຢັນສໍາລັບ 3 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

     

    ຂັ້ນຕອນທີ 2. ການຕິດສະຫລາກຢ່າງໄວວາຂອງ Glycosylamines

    (1) ການແກ້ໄຂການຕິດສະຫລາກ: ເຈືອຈາງສານຕິດສະຫຼາກໜຶ່ງຂວດ (8.2mg/24.6m) ດ້ວຍ DMF ທີ່ບໍ່ມີນ້ໍາ (60. 13μL/180.4μL), ການແກ້ໄຂນີ້ຕ້ອງໄດ້ຮັບການກະກຽມກ່ອນການນໍາໃຊ້), ດູດຊຶມແລະແຈກຢາຍ 5-10 ເທື່ອເພື່ອຮັບປະກັນ reagent ໄດ້ຖືກລະລາຍຢ່າງເຕັມສ່ວນ.

    (2) ຕື່ມການແກ້ໄຂການຕິດສະຫລາກ 6μL ໃສ່ທໍ່ຕິກິຣິຍາ, ດູດຊືມແລະແຈກຢາຍ 5-10 ເທື່ອເພື່ອຮັບປະກັນການປະສົມ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນອະນຸຍາດໃຫ້ປະຕິກິລິຍາການຕິດສະຫລາກຢູ່ໃນຫ້ອງ.

    ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ສໍາ​ລັບ 5 ນາ​ທີ​.

    (3) ຕື່ມ 179 μL acetonitrile, ປະສົມສໍາລັບຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປ.

     

    ຂັ້ນ​ຕອນ​ທີ 3​: ທໍາ​ຄວາມ​ສະ​ອາດ​ຂອງ​ ປ້າຍຊື່ Glycosylaລະເບີດຝັງດິນ

    (1) ຕັ້ງໂຮງງານຜະລິດຄວາມກົດດັນທາງລົບຫຼືໂຮງງານຜະລິດຄວາມກົດດັນທາງບວກແລະແຜ່ນ elution 96 ດີ.

    (2) ນໍ້າສ້າງເງື່ອນໄຂ: ຕື່ມນ້ໍາບໍລິສຸດ 200μL ໃສ່ແຜ່ນ elution ເພື່ອເຮັດໃຫ້ສະພາບດີ, ເກັບຂີ້ເຫຍື້ອໂດຍຖາດຂີ້ເຫຍື້ອ.

    (3) ສ້າງ​ຄວາມ​ສະ​ເໝີ​ພາບ: ຕື່ມ​ນ້ຳ 200μL 15/85 ນ້ຳ​/acetonitrile solution (v/v) ເພື່ອ​ໃຫ້​ນ້ຳ​ມີ​ຄວາມ​ສະ​ເໝີ​ພາບ, ເກັບ​ກຳ​ເສດ​ຈາກ​ຖາດ​ຂີ້ເຫຍື້ອ.

    (4) ໂຫຼດຕົວຢ່າງ: ໂຫຼດຕົວຢ່າງທີ່ເຈືອຈາງ acetonitrile ແລະເກັບຂີ້ເຫຍື້ອດ້ວຍຖາດຂີ້ເຫຍື້ອ.

    (5) ລ້າງນໍ້າສ້າງດ້ວຍ 600μL 1/9/90 ອາຊິດ formic/ultrapure water/acetonitrile(v/v) ສອງຄັ້ງແລະເກັບຂີ້ເຫຍື້ອດ້ວຍຖາດຂີ້ເຫຍື້ອ.

    (6) ເອົາຖາດຂີ້ເຫຍື້ອອອກ, ແລະປ່ຽນເປັນແຜ່ນເກັບ.

    (7) ລ້າງເຊນດ້ວຍ 50μL elution buffer, elute glycans ກັບແຜ່ນເກັບກໍາ, ແລະເຮັດຊ້ໍາຂັ້ນຕອນນີ້.

    (8) ຕື່ມ 200μL ຕົວຢ່າງ diluent, ປົນມັນ.

    ຂັ້ນຕອນທີ 4. HILIC-FLR

    (1) ຖັນ Chromatography: ACQUITY UPLC® Glycan BEH Amide, 130 Å, 1.7 μm, 2. 1 x 150 mm (ສ່ວນຂອງນ້ໍາ #186004742).

    (2​) ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຂອງ​ຖັນ​: 60°C​

    (3) ໄລຍະຂອງແຫຼວ A:50 mM ammonium formate solution (ແນະນໍາ LC-MS), pH = 4.4.

    (4) ໄລຍະຂອງແຫຼວ B: 100% acetonitrile (ຊັ້ນ LC-MS ແມ່ນແນະນໍາ).

    (5) ອັດຕາການໄຫຼ: 0.4 ມລ/ນາທີ;

    (6) Gradient:

    ເວລາ (ນາທີ)

    ອັດຕາການໄຫຼ (ມລ/ນາທີ)

    %A

    %B

    ໂຄ້ງ

    0

    0.4

    25

    75

    6

    35

    0.4

    46

    54

    6

    36.5

    0.2

    100

    0

    6

    39.5

    0.2

    100

    0

    6

    43. 1

    0.2

    25

    75

    6

    47.6

    0.4

    25

    75

    6

    55

    0.4

    25

    75

    6

    (7) ຄວາມຍາວຄື້ນ FLR: EX 265/EM 425 nm

    (8) ອັດຕາຕົວຢ່າງ FLR: 2 Hz

    (9) ປະລິມານສີດ: 10μL

    ກະ​ລຸ​ນາ​ສັງ​ເກດ​ວ່າ​ຕົວ​ກໍາ​ນົດ​ການ​ຂ້າງ​ເທິງ​ໂດຍ​ອີງ​ໃສ່​ເຄື່ອງ​ທີ່​ມີ “ACQUITY® RDa”LCMS​, ຜູ້​ໃຊ້​ສາ​ມາດ​ປັບ​ຕົວ​ກໍາ​ນົດ​ການ​ຕາມ​ອຸ​ປະ​ກອນ​ອື່ນໆ​.

     

    Storage

    Reagent

    ການເກັບຮັກສາ

    IgG

    2-8℃, 12 ເດືອນ

    PNGase F

    -25 ~ – 15 ℃ , 12 ເດືອນ , ຫຼີກ ເວັ້ນ ການ

    freeze/thaw cycles

    PNGase F buffer

    2-8℃, 12 ເດືອນ

    surfactant

    ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, 12 ເດືອນ

    MS reagent Powder

    2-8 ℃​, 12 ເດືອນ​, ຮັກ​ສາ​ໃນ​ຄວາມ​ມືດ​

    DMF ບໍ່ມີນ້ໍາ

    ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, 12 ເດືອນ

    Elution Buffer

    ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, 12 ເດືອນ

    ຕົວ​ຢ່າງ diluent

    ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, 12 ເດືອນ

    ແຜ່ນ elution ດີ 96

    ອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ເມື່ອເປີດແລ້ວ, ນໍ້າສ້າງທີ່ບໍ່ໄດ້ໃຊ້ແລ້ວຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຜະນຶກເຂົ້າກັນດ້ວຍຟິມພາດສະຕິກພາຣາຟິນ ແລະເກັບຮັກສາສານດູດຝຸ່ນໄວ້ທີ່ອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

    200μL ເສັ້ນດ່າງ 8 ທໍ່, ເສັ້ນດ່າງຂອງ

    8 ໝວກ, ແຜ່ນເກັບນ້ຳ 96 ອັນ, ຖາດຂີ້ເຫຍື້ອ

    ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ​, 96 ການ​ເກັບ​ກໍາ​ດີ​

    ແຜ່ນຖືກປະທັບຕາແລະຮັກສາ desiccant ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ

     

    ບັນທຶກ

    ເພື່ອຄວາມປອດໄພ ແລະສຸຂະພາບຂອງເຈົ້າ, ກະລຸນາໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະຖົງມື.

    ໃຊ້ຄໍາແນະນໍາທີ່ສະອາດໃນແຕ່ລະຄັ້ງ

    ກະ​ລຸ​ນາ​ປະ​ຕິ​ບັດ​ຕາມ​ຄູ່​ມື​ການ​ເກັບ​ຮັກ​ສາ​ແລະ​ນໍາ​ໃຊ້ reagents​

     

    ຂຽນຂໍ້ຄວາມຂອງທ່ານທີ່ນີ້ແລະສົ່ງໃຫ້ພວກເຮົາ