ປ່າທໍາມະຊາດ Taq DNA Polymerase
Taq DNA Polymerase ແມ່ນ DNA polymerase ທີ່ທົນທານຕໍ່ຈາກ Thermus aquaticus YT-1, ທີ່ມີກິດຈະກໍາ 5′→3′ polymerase ແລະກິດຈະກໍາ 5′ flap endonuclease.
ອົງປະກອບ
| ອົງປະກອບ | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 ມລ | 2×10 ມລ | 2×50 ມລ | 5×200 ມລ |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 ມລ | 1 ມລ | 5 ມລ | 5×10 ມລ |
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ການຂົນສົ່ງພາຍໃຕ້ 0 ° C ແລະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ° C ~ -15 ° C.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນເອນໄຊທີ່ລວມເອົາ 15 nmol ຂອງ dNTP ເຂົ້າໄປໃນວັດສະດຸທີ່ບໍ່ລະລາຍຂອງອາຊິດໃນເວລາ 30 ນາທີທີ່ 75 ° C.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.ການທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດຂອງທາດໂປຼຕີນ (SDS-PAGE):ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ Taq DNA polymerase ແມ່ນ ≥95% ຖືກກໍານົດໂດຍການວິເຄາະ SDS-PAGE.
2.Endonuclease ກິດຈະກໍາ:ຕໍາ່ສຸດທີ່ 5 U ຂອງ Taq DNA polymerase ກັບ 1 μg λDNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມທີ່ໄດ້ກໍານົດ.
3.ກິດຈະກໍາ Exonuclease:ຕໍາ່ສຸດທີ່ 5 U ຂອງ Taq DNA polymerase ທີ່ມີ 1 μg λ -Hind Ⅲ ຍ່ອຍ DNA ເປັນເວລາ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຕາມການກໍານົດ.
4.ກິດຈະກໍາ Nickase:ຢ່າງໜ້ອຍ 5 U ຂອງ Taq DNA polymerase ທີ່ມີ 1 μg pBR322 DNA ເປັນເວລາ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ອຸນຫະພູມ 37 ອົງສາ C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມທີ່ກວດພົບໄດ້ຕາມທີ່ກຳນົດ.
5.ກິດຈະກໍາ RNase:ຢ່າງໜ້ອຍ 5 U ຂອງ Taq DNA polymerase ທີ່ມີ 1.6 μg MS2 RNA ເປັນເວລາ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ອຸນຫະພູມ 37 ອົງສາ C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມທີ່ກວດພົບໄດ້ຕາມທີ່ກຳນົດ.
6.E. coliDNA:5 U ຂອງ Taq DNA polymerase ຖືກກວດຫາການປະກົດຕົວຂອງ E. coli genomic DNA ໂດຍໃຊ້ TaqMan qPCR ກັບ primers ສະເພາະສໍາລັບ E. coli 16S rRNA locus.ການປົນເປື້ອນ DNA genomic ຂອງ E. coli ແມ່ນ ≤1 ສໍາເນົາ.
7.PCR Amplification (5.0 kb Lambda DNA)- ປະຕິກິລິຍາ 50 µL ທີ່ບັນຈຸ 5 ng Lambda DNA ກັບ 5 ຫນ່ວຍຂອງ Taq DNA Polymerase ສໍາລັບການຂະຫຍາຍ 25 ຮອບ PCR ສົ່ງຜົນໃຫ້ຜະລິດຕະພັນ 5.0 kb ທີ່ຄາດໄວ້.
ການຕັ້ງຄ່າປະຕິກິລິຍາ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ |
| ແມ່ແບບ DNAa | ທາງເລືອກ |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM ແຕ່ລະອັນ) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 ມລ |
| ທາກ DNA Polymeraseຂ | 0.25 ມລ |
| ນ້ໍາທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍ | ສູງເຖິງ 50 μL |
ໝາຍເຫດ:
1) ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງຕິກິຣິຍາທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງແມ່ແບບທີ່ແຕກຕ່າງກັນແມ່ນແຕກຕ່າງກັນ.ຕາຕະລາງຕໍ່ໄປນີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການນໍາໃຊ້ແມ່ແບບແນະນໍາຂອງລະບົບຕິກິຣິຍາ 50 µL.
| DNA | ຈໍານວນ |
| ພັນທຸ ກຳ | 1 ng-1 μg |
| Plasmid ຫຼື Viral | 1 pg-1 ນ |
2) ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ Taq DNA Polymerase ອາດຈະຢູ່ໃນລະດັບຈາກ 0.25 µL ~ 1 µL ໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກພິເສດ.
ປະຕິກິລິຍາໂຄງການ
| ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ(°C) | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| ການສະແດງອອກເບື້ອງຕົ້ນa | 95 ℃ | 5 ນາທີ | - |
| ລັກສະນະ | 95 ℃ | 15-30 ມ | 30-35 ຮອບວຽນ |
| ການຫົດຕົວຂ | 60 ℃ | 15 ສ | |
| ສ່ວນຂະຫຍາຍ | 72 ℃ | 1kb/ນາທີ | |
| ສ່ວນຂະຫຍາຍສຸດທ້າຍ | 72 ℃ | 5 ນາທີ | - |
ໝາຍເຫດ:
1) ເງື່ອນໄຂ denaturation ເບື້ອງຕົ້ນແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການຕິກິຣິຍາ amplification ສ່ວນໃຫຍ່ແລະສາມາດດັດແປງຕາມຄວາມສັບສົນຂອງໂຄງສ້າງແມ່ແບບ.ຖ້າໂຄງສ້າງຂອງແມ່ແບບມີຄວາມຊັບຊ້ອນ, ໄລຍະເວລາກ່ອນການປ່ຽນເປັນສີສາມາດຂະຫຍາຍອອກເປັນ 5 - 10 ນາທີເພື່ອປັບປຸງຜົນກະທົບເບື້ອງຕົ້ນ.
2) ອຸນຫະພູມ annealing ຕ້ອງໄດ້ຮັບການປັບຕາມຄ່າ Tm ຂອງ primer, ເຊິ່ງໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນກໍານົດໄວ້ 3 ~ 5 ℃ຕ່ໍາກວ່າຄ່າ Tm ຂອງ primer ໄດ້;ສໍາລັບແມ່ແບບທີ່ສັບສົນ, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງປັບອຸນຫະພູມ annealing ແລະຂະຫຍາຍເວລາການຂະຫຍາຍເພື່ອບັນລຸການຂະຫຍາຍທີ່ມີປະສິດທິພາບ.
