Superstart qPCR Premix plus-UNG

ໝາຍເລກແມວ: HCB5071E

ຊຸດ: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Lyophilizable

ການດັດແປງພູມຕ້ານທານ, 95 ℃, 1-5 ນາທີເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນ

ຄວາມອ່ອນໄຫວສູງແລະຄວາມສະເພາະ

ການກວດສອບຄວາມຫມັ້ນຄົງຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາ, ມູນຄ່າ fluorescence ສູງ

ສົ່ງສອບຖາມ

ລາຍລະອຽດຜະລິດຕະພັນ

ໝາຍເລກແມວ: HCB5071E

Superstart qPCR Premix plus-UNG ເປັນ reagent ພິເສດທີ່ອອກແບບມາສໍາລັບການປະຕິກິລິຍາທາງຄຸນນະພາບ ແລະປະລິມານຂອງ PCR ໃນເວລາຈິງໂດຍໃຊ້ການກວດຫາທີ່ອີງໃສ່ probe, ພັດທະນາໂດຍສະເພາະສໍາລັບຂະບວນການ lyophilization.ມັນປະກອບດ້ວຍ enzyme Hotstart Taq plus (DG), ເຊິ່ງມີກິດຈະກໍາ enzyme Taq ຂອງມັນຜະນຶກເຂົ້າກັນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ປະສິດທິຜົນ inhibiting amplification ທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະທີ່ເກີດຈາກ primer annealing ທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະຫຼືການສ້າງ primer dimer ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂອຸນຫະພູມຕ່ໍາ, ດັ່ງນັ້ນການປັບປຸງ. ສະເພາະຂອງຕິກິຣິຍາການຂະຫຍາຍ.ທາດປະຕິກິລິຍານີ້ໃຊ້ buffer ສະເພາະ qPCR ທີ່ດີທີ່ສຸດ ແລະລະບົບຕ້ານການປົນເປື້ອນຂອງ UNG/dUTP ເພື່ອບັນລຸການເລີ່ມຕົ້ນທີ່ຮ້ອນໄວ, ປັບປຸງປະສິດທິພາບ ແລະ ຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງປະຕິກິລິຍາ qPCR ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ.ມັນສາມາດໄດ້ຮັບເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານທີ່ດີໃນຂອບເຂດປະລິມານທີ່ກວ້າງຂວາງແລະປະຕິບັດປະລິມານຢ່າງຖືກຕ້ອງ, ປະສິດທິຜົນປ້ອງກັນການຂະຫຍາຍທາງບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງທີ່ເກີດຈາກຜະລິດຕະພັນ PCR ທີ່ຕົກຄ້າງຫຼືການປົນເປື້ອນຂອງ aerosol.ທາດປະສົມນີ້ແມ່ນເຂົ້າກັນໄດ້ກັບເຄື່ອງມື PCR ປະລິມານ fluorescent ສ່ວນໃຫຍ່ຈາກຜູ້ຜະລິດເຊັ່ນ Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ແລະ Roche ແລະອື່ນໆ, ແລະສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມຫມັ້ນຄົງທີ່ດີໃນຮູບແບບ lyophilized.

ທີ່ຜ່ານມາ: BsaI HCP1014A

ຕໍ່ໄປ: Proteinase K (ຂອງແຫຼວ) HC4502A

ອົງປະກອບຂອງ Reagent

1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺ຟຣີ) (DG)

2. 250 mM MgCl₂

3. 4×lyoprotectant (ເລືອກໄດ້)

ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ

ການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວຢູ່ທີ່ -20 ℃;ສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 4 ℃ສໍາລັບການສູງເຖິງ 3 ເດືອນ.ປົນກັນດີກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້ແລະຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງຊ້ຳໆ ແລະ thawing.

Cycling Protocol

ຂັ້ນຕອນ	ອຸນຫະພູມ.	ເວລາ	ຮອບວຽນ
ການຍ່ອຍອາຫານ	50 ℃	2 ນທ	1
ການເປີດໃຊ້ Polymerase	95℃	1-5 ນາທີ	1
Denature	95℃	10~20 ວິນາທີ	40-50
Annealing ແລະການຂະຫຍາຍ	56~64℃	20~60 ວິນາທີ	40-50

qPCR ປະຕິກິລິຍາຂອງແຫຼວ Syການກະກຽມລໍາ

ອົງປະກອບ	ປະລິມານ 25µL	ປະລິມານ 50µL	ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ
5× HotstartPremix plus-UNG(ມກ²⁺ຟຣີ) (DG)	5µL	10µL	1×
250 ມມ MgCl₂	0.45µL	0.9µL	4.5 ມມ
4×lyoprotectant¹	6.25µL	12.5µL	1×
25× Primer-Probe Mix²	1µL	2µL	1×
ແມ່ແບບ DNA³	——	——	——
ddH₂O	ເຖິງ 25µL	ເຖິງ 50µL	——

1. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 0.2μM ສໍາລັບ primers ປົກກະຕິແລ້ວໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີ;ໃນເວລາທີ່ການປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາບໍ່ດີ, ປັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ primer ພາຍໃນຂອບເຂດຂອງ 0.2-1μM ຕາມຄວາມຕ້ອງການ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ Probe ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວຈະຖືກປັບໃຫ້ເໝາະສົມພາຍໃນລະຫວ່າງ 0.1-0.3μM ຜ່ານການທົດລອງ gradient ເພື່ອຊອກຫາການປະສົມປະສານທີ່ດີທີ່ສຸດ.

2. ຈໍານວນສໍາເນົາຂອງ genes ເປົ້າຫມາຍທີ່ມີຢູ່ໃນປະເພດຂອງແມ່ແບບທີ່ແຕກຕ່າງກັນແຕກຕ່າງກັນ;ຖ້າຈໍາເປັນ, ການເຈືອຈາງ gradient ສາມາດປະຕິບັດໄດ້ເພື່ອກໍານົດປະລິມານການເພີ່ມແມ່ແບບທີ່ດີທີ່ສຸດ.

3. ລະບົບນີ້ສາມາດ lyophilized;ເມື່ອລູກຄ້າໃຊ້ລະບົບນີ້ໂດຍບໍ່ມີການກໍານົດການແຊ່ເຢັນ, 4 × lyoprotectant ສາມາດເລືອກໄດ້; ຖ້າມີຜະລິດຕະພັນແຫ້ງແລ້ງທີ່ຈໍາເປັນ, ໃນລະຫວ່າງການກວດສອບປະສິດທິພາບຂອງຜະລິດຕະພັນ, ມັນຕ້ອງເພີ່ມ 4 × lyoprotectant ເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມສອດຄ່ອງຂອງອົງປະກອບຂອງລະບົບ lyophilized. ແລະຜົນກະທົບ.

ເມື່ອລະບົບຖືກໃຊ້d ສໍາລັບ freeze-ຕາກໃຫ້ແຫ້ງ, ກະກຽມ ລະບົບ as ຕໍ່ໄປນີ້:

ອົງປະກອບ	25µL ລະບົບປະຕິກິລິຍາ
5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺ຟຣີ) (DG)	5µL
250 ມມ MgCl₂	0.45µL
4×lyoprotectant	6.25µL
25× Primer-Probe Mix	1µL
ddH₂O	ເຖິງ 18-20µL

* ຖ້າລະບົບອື່ນໆສໍາລັບການອົບແຫ້ງແມ່ນຈໍາເປັນ, ກະລຸນາປຶກສາແຍກຕ່າງຫາກ.

ຂະບວນການ Lyophilizationss

ຂັ້ນຕອນ	ອຸນຫະພູມ.	ເວລາ	ສະພາບ	ຄວາມກົດດັນ
ການແຊ່ແຂງກ່ອນ	4 ℃	30 ນທ	ຖື	1 atm
	-50 ℃	60 ນທ	ຄວາມເຢັນ
	-50 ℃	180 ນທ	ຖື
ການອົບແຫ້ງຂັ້ນຕົ້ນ	-30℃	60 ນທ	ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ	ສູນຍາກາດສູງສຸດ
ການອົບແຫ້ງຂັ້ນຕົ້ນ	-30℃	70 ນທ	ຖື	ສູນຍາກາດສູງສຸດ
ການອົບແຫ້ງຂັ້ນສອງ	25℃	60 ນທ	ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ	ສູນຍາກາດສູງສຸດ
ການອົບແຫ້ງຂັ້ນສອງ	25℃	300 ນທ	ຖື	ສູນຍາກາດສູງສຸດ

1. ຂະບວນການ lyophilization ນີ້ແມ່ນຂະບວນການແຊ່ແຂງຢູ່ໃນບ່ອນສໍາລັບລະບົບປະຕິກິລິຍາ 25µL;ຖ້າການອົບແຫ້ງແບບແຊ່ແຂງ ຫຼືຂະບວນການອົບແຫ້ງຢູ່ໃນບ່ອນອື່ນແມ່ນຕ້ອງການ, ກະລຸນາສອບຖາມແຍກຕ່າງຫາກ.

2. ຂະບວນການ lyophilization ຂ້າງເທິງນີ້ແມ່ນສໍາລັບການອ້າງອີງເທົ່ານັ້ນ.ປະເພດຜະລິດຕະພັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະເຄື່ອງອົບແຫ້ງທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີຕົວກໍານົດການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ດັ່ງນັ້ນການປັບຕົວສາມາດເຮັດໄດ້ຕາມຄວາມເປັນຈິງເງື່ອນໄຂໃນລະຫວ່າງການນໍາໃຊ້.

3. ຂະບວນການ lyophilization ທີ່ແຕກຕ່າງກັນອາດຈະເຫມາະສົມກັບຂະຫນາດ batch ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ lyophilizedຜະລິດຕະພັນ, ດັ່ງນັ້ນການກວດສອບພຽງພໍຕ້ອງໄດ້ຮັບການປະຕິບັດໃນເວລາທີ່ນໍາໃຊ້ສໍາລັບການຜະລິດຂະຫນາດໃຫຍ່.

ຄໍາແນະນໍາສໍາລັບການນໍາໃຊ້ lyophilized ຝຸ່ນ

1. ເອົາຜົງ lyophilized centrifuge ສັ້ນໆ;

2. ເພີ່ມແມ່ແບບອາຊິດນິວຄລີອິກໃສ່ຜົງ lyophilized ແລະຕື່ມນ້ໍາເຖິງ 25µL;

3. ປົນກັນໂດຍການ centrifugation ແລະດໍາເນີນການກ່ຽວກັບເຄື່ອງ.

ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ:

1. ການທົດສອບການເຮັດວຽກ: ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ສະເພາະ, ການສືບພັນຂອງ qPCR.

2. ບໍ່ມີກິດຈະກໍານິວເຄລຍ exogenous, ບໍ່ມີການປົນເປື້ອນ endo/exonuclease.

ຂໍ້ມູນດ້ານວິຊາການ:

1. Superstart qPCR Premix plus-UNG ໃຊ້ enzyme hot-start ໃຫມ່ທີ່ຊ່ວຍໃຫ້ການເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນໄວພາຍໃນ 1~5 ນາທີ;ໂດຍຜ່ານຮູບແບບ buffer ພິເສດ, ມັນເຫມາະສົມສໍາລັບ multiplex fluorescent ຕິກິລິຍາ PCR ປະລິມານ.

2. ມັນມີຄວາມສະເພາະທີ່ສູງຂຶ້ນເຊິ່ງຊ່ວຍປັບປຸງຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງ fluorescence ປະລິມານການກວດສອບ PCR ຈໍາກັດຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ເຮັດໃຫ້ເສັ້ນໂຄ້ງຂະຫຍາຍປົກກະຕິ, ມູນຄ່າ fluorescence ໄດ້ຮັບການປັບປຸງທີ່ຊັດເຈນຢູ່ໃນແມ່ແບບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາ, ເຫມາະກັບຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ fluorescence PCR reagents ການກວດສອບປະລິມານ.

3. ສໍາລັບ primers ທີ່ມີອຸນຫະພູມຕ່ໍາ annealing ຫຼືຍາວກວ່າ fragments 200bp, ແນະນໍາວິທີການ 3 ຂັ້ນຕອນ.

4. ປະສິດທິພາບການນໍາໃຊ້ຂອງ dUTP ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ enzyme UNG ແຕກຕ່າງກັນສໍາລັບ genes ເປົ້າຫມາຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ດັ່ງນັ້ນຖ້າຫາກວ່າການນໍາໃຊ້ລະບົບ UNG ນໍາໄປສູ່ການຫຼຸດລົງຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວໃນການກວດສອບ, ລະບົບຕິກິຣິຍາຄວນໄດ້ຮັບການປັບແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບ.ຖ້າຕ້ອງການການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານວິຊາການ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່ບໍລິສັດຂອງພວກເຮົາ.

5. ໃຊ້ພື້ນທີ່ອຸທິດຕົນແລະທໍ່ທໍ່ກ່ອນແລະຫຼັງການຂະຫຍາຍ, ໃສ່ຖົງມືໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານແລະປ່ຽນແທນເລື້ອຍໆ;ຢ່າເປີດທໍ່ປະຕິກິລິຍາຫຼັງຈາກ PCR ສໍາເລັດເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການປົນເປື້ອນຂອງຕົວຢ່າງໂດຍຜະລິດຕະພັນ PCR.