Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
ໝາຍເລກແມວ: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ເປັນຊຸດ PCR ປະລິມານ multiplex ໂດຍອີງໃສ່ RNA ເປັນແມ່ແບບ.ໃນຂະບວນການຂອງການທົດລອງ, ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນແລະ PCR ປະລິມານໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ໃນທໍ່ດຽວກັນ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການປະຕິບັດການທົດລອງງ່າຍດາຍແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ.ໃນຊຸດນີ້, cDNA strand ທໍາອິດໄດ້ຖືກສັງເຄາະຢ່າງມີປະສິດທິພາບໂດຍ Reverse Transcriptase ທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນແລະຂະຫຍາຍປະລິມານໂດຍ HotStart Tag DNA Polymerase.ຊຸດສ່ວນໃຫຍ່ປະກອບດ້ວຍ MP buffer ທີ່ດີທີ່ສຸດ, enzymes mix, ແລະອື່ນໆ. ການແກ້ໄຂບັຟເຟີມີ Mg ແລ້ວ.2+ແລະ dNTP.ນອກຈາກນັ້ນ, ປັດໃຈທີ່ສາມາດຍັບຍັ້ງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ບໍ່ສະເພາະແລະປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຂອງປະຕິກິລິຍາ qPCR ຫຼາຍ, ເຊິ່ງສາມາດຮັບປະກັນປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແລະປະຕິບັດເຖິງຕິກິຣິຍາ amplification ຫຼາຍ.ລະບົບ dUTP/UDG ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນການປ້ອງກັນຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນຂອງ aerosol.
ອົງປະກອບ
1. Buffer
2. Enzyme Mix
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ
| ເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນ | ການເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນໃນຕົວ |
| ວິທີການກວດຫາ | ການກວດພົບ primer-probe |
| ວິທີການ PCR | ຫນຶ່ງຂັ້ນຕອນ RT-qPCR |
| ໂພລີເມີເຣສ | ທາກ DNA polymerase |
| ປະເພດຂອງຕົວຢ່າງ | DNA |
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ຜະລິດຕະພັນໄດ້ຖືກຂົນສົ່ງດ້ວຍກ້ອນແຫ້ງແລະສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ -25 ~ -15 ℃ເປັນເວລາ 1 ປີ.ມັນຄວນຈະຫຼີກເວັ້ນເລື້ອຍໆfreeze-thaw.ແນະນໍາໃຫ້ປະຫຍັດແຍກຕ່າງຫາກ.
ຄໍາແນະນໍາ
1.ປະຕິກິລິຍາ ລະບົບ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ (μL) | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Enzyme Mix | 1 | - |
| Primer/Probe mix (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| ແມ່ແບບ RNA | 1-10 | - |
| RNase ຟຣີ H2O | ເຖິງ 25 | - |
ໝາຍເຫດ:
ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າປົນກັນດີກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້, ຫຼີກເວັ້ນການຟອງຫຼາຍເກີນໄປທີ່ເກີດຈາກການສັ່ນສະເທືອນທີ່ຮຸນແຮງ.
ກ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ primer: ປະສົມ primer ລວມທັງ primer multiplex, ອີງຕາມສະຖານະການທີ່ດີທີ່ສຸດຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ primer ອາດຈະຢູ່ລະຫວ່າງ 0.l ແລະ 1.0μM.
ຂ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ Probe: ການປະສົມຂອງ Probe ລວມທັງການຕິດສະຫຼາກຂອງ multiplex probe ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງກຸ່ມ fluorescent, ຂຶ້ນກັບສະຖານະການຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ probe ທີ່ດີທີ່ສຸດອາດຈະຢູ່ລະຫວ່າງ 0.05 ແລະ 0.5μM.
ຄ.ການເຈືອຈາງແມ່ແບບ: qPCR ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ ແລະແນະນຳໃຫ້ເຈືອຈາງແມ່ແບບ.ຄ່າ Ct ຄວບຄຸມແມ່ນເຫມາະສົມລະຫວ່າງ 20 ແລະ 35.
ງ.ການກະກຽມລະບົບ: ກະລຸນາກະກຽມໃນຕາຕະລາງການເຮັດວຽກທີ່ສະອາດທີ່ສຸດ, ແລະທໍ່ທໍ່ທໍ່ແລະປະຕິກິລິຍາທີ່ບໍ່ມີສານຕົກຄ້າງ nuclease;ແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຫົວປືນທີ່ມີອົງປະກອບການກັ່ນຕອງ.ຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂ້າມແລະການປົນເປື້ອນ aerosol.
2. ການຂີ່ລົດຖີບທີ່ເໝາະສົມພິທີການ
| ຮອບວຽນ ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ. | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນ | 50 ℃ກ | 20 ນາທີ | 1 |
| Initial-denaturation | 95℃ | 5 ນາທີ | 1 |
| ປະຕິກິລິຍາການຂະຫຍາຍ | 95℃ | 15 ວິນາທີ |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 ວິ c |
ໝາຍເຫດ:
ກ.Reverse transcription: ອຸນຫະພູມສາມາດເລືອກ 42°C ຫຼື 50°C.
ຂ.ປະຕິກິລິຍາການຂະຫຍາຍ: ອຸນຫະພູມຖືກປັບຕາມຄ່າ Tm ຂອງ primers ທີ່ອອກແບບ.
ຄ.ການໄດ້ຮັບສັນຍານ fluorescence: ກະລຸນາກໍານົດຂັ້ນຕອນການທົດລອງຕາມຄວາມຕ້ອງການຂອງຄູ່ມືເຄື່ອງມື.
ບັນທຶກ
ກະລຸນາໃສ່ PPE ທີ່ຈໍາເປັນ, ເຊັ່ນ: ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງແລະຖົງມື, ເພື່ອຮັບປະກັນສຸຂະພາບແລະຄວາມປອດໄພຂອງທ່ານ.
