2× Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
ໝາຍເລກແມວ: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ຖືກອອກແບບມາເພື່ອປະຕິບັດ PCR ໂດຍກົງຈາກຕົວຢ່າງໂດຍບໍ່ມີການສະກັດ DNA ຫຼືການກະກຽມຕົວຢ່າງ.ທາດປະສົມນີ້ປະກອບດ້ວຍ DNA polymerase ເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນ, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (ກັບ dUTP ແທນ dTTP), ແລະ stabilizers, ສໍາລັບ PCR ປະລິມານ (qPCR).ທາດ reagent ນີ້ preforms ຄວາມທົນທານຕໍ່ inhibitor ສູງ, ແລະດັ່ງນັ້ນ, ມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງກັບການກວດສອບຕົວຢ່າງເຊັ່ນ: swab ຄໍ, ນໍ້າລາຍ, ຕ້ານການ coagulated ເລືອດທັງຫມົດ, plasma, ແລະ serum ໂດຍບໍ່ມີການສະກັດ DNA.ທາດ reagent ໃຊ້ buffer ທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງສໍາລັບ qPCR ກັບ enzymes ປະສົມຂອງ DNA polymerase ຕ້ານການຍັບຍັ້ງແລະ enzyme UNG.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນສາມາດໄດ້ຮັບການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາທີ່ດີໃນຕົວຢ່າງທີ່ມີສານຍັບຍັ້ງແລະຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍທາງບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງທີ່ເກີດຈາກມົນລະພິດ PCR ແລະ aerosol.ທາດປະສົມນີ້ແມ່ນເຂົ້າກັນໄດ້ກັບອຸປະກອນ PCR ປະລິມານ fluorescent ສ່ວນໃຫຍ່, ເຊັ່ນ: Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ແລະອື່ນໆ.
ອົງປະກອບ
1. 50× SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ອົງປະກອບທັງຫມົດຄວນໄດ້ຮັບການເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ℃ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວແລະ 4 ℃ສໍາລັບເຖິງ 3 ເດືອນ.ກະລຸນາປະສົມຢ່າງລະອຽດຫຼັງຈາກ thawing ແລະ centrifuge ກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້.ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງເລື້ອຍໆ.
Cycling Protocol
| ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| ການຍ່ອຍອາຫານ | 50 ℃ | 2 ນທ | 1 |
| ການເປີດໃຊ້ Polymerase | 95℃ | 1-5 ນາທີ | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20ວິ | 40-50 |
| ການບີບອັດ/ຂະຫຍາຍ | 56-64℃ | 20-60s |
ຄໍາແນະນໍາກ່ຽວກັບທໍ່
| Reagent | ປະລິມານຕໍ່ ປະຕິກິລິຍາ | ປະລິມານຕໍ່ປະຕິກິລິຍາ | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| 2× SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50× SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25× Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| ຕົວຢ່າງ3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| ປະລິມານທັງໝົດ | 25 ມລ | 50 ມລ | - |
1. ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ primer ແມ່ນປົກກະຕິແລ້ວ 0.2μM.ສໍາລັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີກວ່າ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ສາມາດຖືກປັບປຸງໃຫ້ເຫມາະສົມພາຍໃນຂອບເຂດຂອງ 0.2-1μM.
2. ໂດຍທົ່ວໄປ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ probe ສາມາດໄດ້ຮັບການ optimized ພາຍໃນຂອບເຂດຂອງ 0.1-0.3μM.ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ probe ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບເຄື່ອງມືຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ແທ້ຈິງ, ປະເພດຂອງ probe, ແລະປະເພດຂອງສານຕິດສະຫຼາກ fluorescent.ກະລຸນາເບິ່ງຄູ່ມືອຸປະກອນຫຼືຄວາມຕ້ອງການສະເພາະຂອງການ probe fluorescent ແຕ່ລະຄົນ.
3. ປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຕົວຢ່າງມີປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະເນື້ອໃນ inhibitor ແລະສໍາເນົາຈໍານວນຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍ.ປະລິມານຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການພິຈາລະນາໂດຍສະພາບຕົວຈິງ.ເຮັດການເຈືອຈາງຂອງຕົວຢ່າງໂດຍການເພີ່ມນ້ໍາທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍຫຼື TE Buffer, ຖ້າຈໍາເປັນ.
4. ປະລິມານທີ່ແນະນໍາຂອງຕົວຢ່າງທີ່ແຕກຕ່າງກັນ:
| ຕົວຢ່າງ | ປະລິມານສໍາລັບຫນຶ່ງ 50 μL ປະຕິກິລິຍາ | ສູງສຸດ ອັດຕາສ່ວນ |
| Anticoagulated ເລືອດທັງຫມົດ | 2.5 ມລ | 5% |
| Plasma | 15 ມລ | 30% |
| ເຊລັມ | 10 ມລ | 20% |
| ຮູຄໍ | 10 ມລ | 20% |
| ນໍ້າລາຍ | 10 ມລ | 20% |
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1. ການກວດຫາຟັງຊັນ: ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ສະເພາະ ແລະ ການເຮັດຊ້ຳຂອງ qPCR.
2. ບໍ່ມີກິດຈະກໍານິວເຄລຍ exogenous: ບໍ່ມີ exogenous endonuclease ແລະມົນລະພິດ exonuclease.
ຫມາຍເຫດຂອງຜະລິດຕະພັນ
1. ຜະລິດຕະພັນນີ້ໃຊ້ປະເພດໃຫມ່ຂອງ DNA polymerase ເລີ່ມຕົ້ນຮ້ອນ, ເຊິ່ງສາມາດເປີດໃຊ້ໄດ້ໃນ 1-5 ນາທີ. ນັບຕັ້ງແຕ່ buffer ຕິກິຣິຍາຂອງມັນໄດ້ຖືກປັບປຸງ, ມັນເຫມາະສົມກັບ PCR ປະລິມານ fluorescence ສອງເທົ່າຫຼືຫຼາຍໂດຍໃຊ້ວິທີການ probe.
2. ຖ້າຄ່າ Rn ຂອງການຂະຫຍາຍ PCR ຕໍ່າເກີນໄປຫຼືການຂະຫຍາຍໃຫຍ່ແມ່ນຖືກຍັບຍັ້ງຢ່າງຈະແຈ້ງ, ການຫຼຸດລົງຂອງຈໍານວນຕົວຢ່າງ, ການເພີ່ມປະລິມານປະຕິກິລິຍາຫຼືການເຈືອຈາງຂອງຕົວຢ່າງທີ່ຜ່ານມາອາດຈະປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບ.
3. ການເກັບເລືອດ, ນໍ້າລາຍ, ນໍ້າປັດສະວະ, ຮູຄໍ ແລະ ອື່ນໆ ຄວນປະຕິບັດຕາມເງື່ອນໄຂຂອງຄລີນິກ, ແລະ ຕົວຢ່າງສົດສາມາດປ້ອງກັນການເສື່ອມສະພາບຂອງກົດນິວຄລີອິກໄດ້.
4. ເນື່ອງຈາກ amplicons ທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີປະສິດທິພາບການນໍາໃຊ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນກັບ dUTP ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ UNG, reagents ຄວນໄດ້ຮັບການປັບປຸງໃຫ້ເຫມາະສົມຖ້າຫາກວ່າຄວາມອ່ອນໄຫວໃນການກວດສອບຫຼຸດລົງໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້ລະບົບ UNG.ກະລຸນາຕິດຕໍ່ພວກເຮົາສໍາລັບການຊ່ວຍເຫຼືອດ້ານວິຊາການຖ້າຈໍາເປັນ.
5. ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຂະຫຍາຍຜະລິດຕະພັນ PCR ທີ່ມີການປະຕິບັດລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນດຽວ, ພື້ນທີ່ທົດລອງທີ່ອຸທິດຕົນແລະ pipette ແມ່ນຕ້ອງການສໍາລັບການຂະຫຍາຍ.ປະຕິບັດດ້ວຍຖົງມືແລະປ່ຽນເລື້ອຍໆແລະບໍ່ເປີດທໍ່ປະຕິກິລິຍາຫຼັງຈາກການຂະຫຍາຍ PCR.
