Hotstart Taq DNA Polymerase
Hot Start Taq DNA Polymerase (ການດັດແປງພູມຕ້ານທານ) ເປັນ DNA polymerase ເລີ່ມຕົ້ນທີ່ທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນຈາກ Thermus aquaticus YT-1, ທີ່ມີກິດຈະກໍາໂພລີເມເຣດ 5′→3′ ແລະກິດຈະກໍາ endonuclease 5′ flap.Taq DNA polymerase ເລີ່ມຕົ້ນທີ່ຮ້ອນແມ່ນ Taq DNA polymerase ທີ່ດັດແປງໂດຍ antibodies Tq thermolabile.ການດັດແປງພູມຕ້ານທານໄດ້ເພີ່ມຄວາມສະເພາະ, ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ແລະຜົນຜະລິດຂອງ PCR.
ອົງປະກອບ
| ອົງປະກອບ | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 ມລ | 4×10 ມລ | 4×50 ມລ | 5×400 ມລ |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (ແອນຕິບໍດີແກ້ໄຂ) (5 U/μL) | 0.1 ມລ | 1 ມລ | 5 ມລ | 10×5 ມລ |
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 ທີ່ 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 ແລະ 50% Glycerol.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ການຂົນສົ່ງພາຍໃຕ້ 0 ° C ແລະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ° C ~ -15 ° C.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນເອນໄຊທີ່ລວມເອົາ 15 nmol ຂອງ dNTP ເຂົ້າໄປໃນວັດສະດຸທີ່ບໍ່ລະລາຍຂອງອາຊິດໃນເວລາ 30 ນາທີທີ່ 75 ° C.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.Endonuclease ກິດຈະກໍາ:incubation ຂອງ 20 U ຂອງ enzyme ກັບ 4 μg pUC19 DNA ສໍາລັບ 4 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA ໄດ້ຕາມການກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
2.5 kb Lambda PCR:25 ວົງຈອນການຂະຫຍາຍ PCR ຂອງ 5 ng Lambda DNA ກັບ 1.25 ຫນ່ວຍຂອງ Taq DNA Polymerase ໃນທີ່ປະທັບຂອງ 200 µM dNTPs ແລະ primers 0.2 µM ສົ່ງຜົນໃຫ້ຜະລິດຕະພັນທີ່ຄາດວ່າຈະມີ 5 kb.
3.ກິດຈະກໍາ Exonuclease:incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50 µl ທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ 12.5 U ຂອງ Taq DNA Polymerase ກັບ 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide ສໍາລັບ 30 ນາທີທີ່ 37 ℃ຜົນຜະລິດບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້.
4.ກິດຈະກໍາ RNase:incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 10 µL ບັນຈຸ 20 U ຂອງ enzyme ກັບ 1μg ຂອງ RNA transcripts ເປັນເວລາ 2 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA ທີ່ກວດພົບໄດ້ຕາມການກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
5.ການກະຕຸ້ນຄວາມຮ້ອນ:ບໍ່.
ລະບົບປະຕິກິລິຍາ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ |
| ແມ່ແບບ DNAa | ທາງເລືອກ |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 ມລ |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 ມລ |
| dNTP Mix (10mM ແຕ່ລະອັນ) | 0.5 ມລ |
| 5×HC Taq Buffer | 5 ມລ |
| ທາກ DNA Polymeraseຂ(5U/μL) | 0.125 ມລ |
| ນ້ໍາທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍ | ສູງເຖິງ 25 μL |
ໝາຍເຫດ:
1) ກ.
| DNA | ຈໍານວນ |
| ພັນທຸ ກຳ | 1 ng-1 μg |
| Plasmid ຫຼື Viral | 1 pg-1 ນ |
2) ຂ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ Taq DNA Polymerase ອາດຈະຢູ່ລະຫວ່າງ 5-50 units/mL (0.1-0.5 units/25 µL ຕິກິຣິຍາ) ໃນການນໍາໃຊ້ສະເພາະ.
ອະນຸສັນຍາການຂີ່ລົດຖີບຄວາມຮ້ອນ
PCR
| ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ(°C) | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| ການສະແດງອອກເບື້ອງຕົ້ນa | 95 ℃ | 1-3 ນາທີ | - |
| ລັກສະນະ | 95 ℃ | 15-30 ມ | 30-35 ຮອບວຽນ |
| ການຫົດຕົວຂ | 45-68 ℃ | 15-60 ມ | |
| ສ່ວນຂະຫຍາຍ | 68 ℃ | 1kb/ນາທີ | |
| ສ່ວນຂະຫຍາຍສຸດທ້າຍ | 68 ℃ | 5 ນາທີ | - |
ໝາຍເຫດ:
1) ການປັບຕົວເບື້ອງຕົ້ນຂອງ 1 ນາທີຢູ່ທີ່ 95 ° C ແມ່ນພຽງພໍສໍາລັບການຂະຫຍາຍສ່ວນໃຫຍ່.ສໍາລັບແມ່ແບບທີ່ຫຍຸ້ງຍາກ, ແນະນໍາໃຫ້ມີການປ່ຽນສີທີ່ຍາວກວ່າ 2-3 ນາທີຢູ່ທີ່ 95 ° C.ດ້ວຍ colon PCR, ແນະນຳໃຫ້ມີການປ່ຽນສີເບື້ອງຕົ້ນ 5 ນາທີຢູ່ທີ່ 95°C.
2) ຂັ້ນຕອນການ annealing ໂດຍປົກກະຕິ 15-60 s.ອຸນຫະພູມ Annealing ແມ່ນອີງໃສ່ Tm ຂອງຄູ່ primer ແລະປົກກະຕິແມ່ນ 45-68 ℃.
