Bst 2.0 DNA Polymerase (ບໍ່ມີ Glycerol)
Bst DNA polymerase V2 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກ Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, ເຊິ່ງມີກິດຈະກໍາ 5′→3′ DNA polymerase ແລະກິດຈະກໍາການທົດແທນຕ່ອງໂສ້ທີ່ເຂັ້ມແຂງ, ແຕ່ບໍ່ມີກິດຈະກໍາ 5′→3′ exonuclease.Bst DNA Polymerase V2 ເໝາະ ສົມທີ່ສຸດ ສຳ ລັບການເຄື່ອນທີ່ຂອງສາຍ, ການຂະຫຍາຍໄຟສາຍ isothermal (loop mediated isothermal amplification) ແລະການຈັດລໍາດັບຢ່າງໄວວາ.
ອົງປະກອບ
| ອົງປະກອບ | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (ບໍ່ມີ Glycerol) (8U/μL) | 0.2 ມລ | 1 ມລ | 10 ມລ |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 ມລ | 2×1.5 ມລ | 3×10 ມລ |
| MgSO4(100 ມມ) | 1.5 ມລ | 2×1.5 ມລ | 2×10 ມລ |
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA strand ປະຕິກິລິຍາການຍ້າຍດຽວ
3.High GC ລໍາດັບລໍາດັບ
4.DNA ລໍາດັບລະດັບ nanogram.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ການຂົນສົ່ງພາຍໃຕ້ 0 ° C ແລະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ° C ~ -15 ° C.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນເອນໄຊທີ່ລວມເອົາ 25 nmol ຂອງ dNTP ເຂົ້າໄປໃນວັດສະດຸທີ່ບໍ່ລະລາຍຂອງອາຊິດໃນເວລາ 30 ນາທີທີ່ 65 ° C.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.ການທົດສອບຄວາມບໍລິສຸດຂອງທາດໂປຼຕີນ (SDS-PAGE):ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ Bst DNA polymerase V2 ແມ່ນ ≥99% ຖືກກໍານົດໂດຍການວິເຄາະ SDS-PAGE ໂດຍໃຊ້ການກວດຫາ Coomassie Blue.
2.ກິດຈະກໍາ Exonuclease:incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50 μLທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ 8 U ຂອງ Bst DNA polymerase V2 ກັບ 1 μg λ -Hind Ⅲຍ່ອຍ DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ຜົນໄດ້ຮັບບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມທີ່ກວດພົບຕາມກໍານົດ.
3.ກິດຈະກໍາ Nickase:incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50 μLທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ຂອງ 8 U ຂອງ Bst DNA polymerase V2 ກັບ 1 μg pBR322 DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມກໍານົດ.
4.ກິດຈະກໍາ RNase:incubation ຂອງຕິກິຣິຍາ 50 μLທີ່ມີຕໍາ່ສຸດທີ່ 8 U ຂອງ Bst DNA polymerase V2 ກັບ 1.6 μg MS2 RNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມສາມາດກວດພົບໄດ້ຕາມທີ່ໄດ້ກໍານົດ.
5.E. coli DNA:120 U ຂອງ Bst DNA polymerase V2 ຖືກກວດຫາການປະກົດຕົວຂອງ E. coli genomic DNA ໂດຍໃຊ້ TaqMan qPCR ກັບ primers ສະເພາະສໍາລັບ E. coli 16S rRNA locus.ການປົນເປື້ອນ DNA genomic ຂອງ E. coli ແມ່ນ ≤1 ສໍາເນົາ.
ປະຕິກິລິຍາຂອງໂຄມໄຟ
| ອົງປະກອບ | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 ມລ |
| MgSO4 (100 ມມ) | 1.5 ມລ |
| dNTPs (10mM ແຕ່ລະອັນ) | 3.5 ມລ |
| SYTO™ 16 ສີຂຽວ (25×)a | 1.0 ມລ |
| ປະສົມ primerb | 6 ມລ |
| Bst DNA Polymerase V2 (ບໍ່ມີ Glycerol) (8 U/uL) | 1 μL |
| ແມ່ແບບ | × μL |
| ddH₂O | ສູງເຖິງ 25 μL |
ໝາຍເຫດ:
1) ກ.SYTOTM 16 ສີຂຽວ (25 ×): ອີງຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນການທົດລອງ, ສີຍ້ອມສີອື່ນໆສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ແທນ;
2) ຂ.ການປະສົມ primer: ໄດ້ຮັບໂດຍການປະສົມ 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB ແລະປະລິມານອື່ນໆ.
ປະຕິກິລິຍາແລະເງື່ອນໄຂ
1 × HC Bst V2 Buffer, ອຸນຫະພູມ incubation ແມ່ນລະຫວ່າງ 60 ° C ແລະ 65 ° C.
ການກະຕຸ້ນຄວາມຮ້ອນ
80°C, 20 ນາທີ
