ຊຸດສະກັດ DNA/RNA ໄວຣັສ
ຊຸດນີ້ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການສະກັດເອົາຢ່າງໄວວາຂອງ DNA / RNA ໄວຣັສທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດສູງຈາກຕົວຢ່າງເຊັ່ນ: nasopharyngeal swabs, swabs ສິ່ງແວດລ້ອມ, supernatants ວັດທະນະທໍາຂອງເຊນ, ແລະ supernatants homogenate ເນື້ອເຍື່ອ.ຊຸດດັ່ງກ່າວແມ່ນອີງໃສ່ເທກໂນໂລຍີການຊໍາລະລ້າງເຍື່ອຊິລິກາທີ່ກໍາຈັດຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການນໍາໃຊ້ສານລະລາຍອິນຊີ phenol / chloroform ຫຼືຝົນຂອງເຫຼົ້າທີ່ໃຊ້ເວລາຫຼາຍເພື່ອສະກັດເອົາ DNA / RNA ໄວຣັສທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງ.ອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ໄດ້ຮັບແມ່ນບໍ່ມີສິ່ງສົກກະປົກ ແລະພ້ອມທີ່ຈະໃຊ້ໃນການທົດລອງທາງລຸ່ມເຊັ່ນ: ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນ, PCR, RT-PCR, PCR ໃນເວລາຈິງ, ການຈັດລໍາດັບຮຸ່ນຕໍ່ໄປ (NGS), ແລະ blot Northern.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ 15 ~ 25 ℃, ແລະການຂົນສົ່ງຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ
ອົງປະກອບ
| ອົງປະກອບ | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ມລ |
| Buffer RW | 120 ມລ |
| RNase-free ddH2 O | 6 ມລ |
| ຖັນ FastPure RNA | 100 |
| ທໍ່ເກັບ (2ml) | 100 |
| ທໍ່ຄໍເລັກຊັນທີ່ບໍ່ມີ RNase (1 .5ml) | 100 |
Buffer VL:ສະຫນອງສະພາບແວດລ້ອມສໍາລັບ lysis ແລະການຜູກມັດ.
Buffer RW:ເອົາທາດໂປຼຕີນທີ່ຕົກຄ້າງແລະ impurities ອື່ນໆ.
ddH2O ທີ່ບໍ່ມີ RNase:Elute DNA/RNA ຈາກເຍື່ອໃນຖັນ spin.
ຖັນ FastPure RNA:ໂດຍສະເພາະການດູດຊຶມ DNA / RNA.
ທໍ່ເກັບ 2 ມລ:ເກັບກໍາການກັ່ນຕອງ.
ທໍ່ຄໍເລັກຊັນທີ່ບໍ່ມີ RNase 1.5 ມລ:ເກັບກຳ DNA/RNA.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
swabs nasopharyngeal, swabs ສິ່ງແວດລ້ອມ, supernatants ວັດທະນະທໍາຈຸລັງ, ແລະຈຸລັງ homogenate supernatants.
Mater ຕົນເອງກະກຽມials
ເຄັດລັບ RNase-free pipette, 1.5 ml RNase-free tub centrifuge, centrifuge, vortex mixer, ແລະ pipettes.
ຂະບວນການທົດລອງ
ປະຕິບັດທຸກຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປນີ້ໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ.
1. ຕື່ມ 200 μl ຂອງຕົວຢ່າງໃສ່ທໍ່ centrifuge ທີ່ບໍ່ມີ RNase (ປະກອບກັບ PBS ຫຼື 0.9% NaCl ໃນກໍລະນີຂອງຕົວຢ່າງບໍ່ພຽງພໍ), ຕື່ມ 500 μlຂອງ Buffer VL, ປົນກັນໂດຍ vortexing ສໍາລັບ 15 - 30 ວິນາທີ, ແລະ centrifuge. ໄລຍະສັ້ນໆເພື່ອເກັບກໍາສ່ວນປະສົມຢູ່ດ້ານລຸ່ມຂອງທໍ່.
2. ວາງຖັນ FastPure RNA ໃນທໍ່ເກັບ 2 ml.ໂອນປະສົມຈາກຂັ້ນຕອນທີ 1 ໄປຫາຖັນ FastPure RNA, centrifuge ທີ່ 12,000 rpm (13,400 × g) ສໍາລັບ 1 ນາທີ, ແລະຖິ້ມການກັ່ນຕອງ.
3. ເພີ່ມ Buffer RW 600 μlໃສ່ຖັນ FastPure RNA, centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,400 × g) ສໍາລັບ 30 ວິນາທີ, ແລະຖິ້ມການກັ່ນຕອງ.
4. ເຮັດຊ້ຳຂັ້ນຕອນທີ 3.
5. Centrifuge ຖັນເປົ່າຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,400 × g) ສໍາລັບ 2 min.
6. ລະມັດລະວັງໂອນ FastPure RNA Columns ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ຄໍເລັກຊັນໃຫມ່ທີ່ບໍ່ມີ RNase 1.5 ml (ສະຫນອງໃຫ້ຢູ່ໃນຊຸດ), ແລະເພີ່ມ 30 – 50 μlຂອງ ddH2O ທີ່ບໍ່ມີ RNase ກັບສູນກາງຂອງເຍື່ອໂດຍບໍ່ມີການສໍາຜັດກັບຖັນ.ອະນຸຍາດໃຫ້ຢືນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 1 ນາທີແລະ centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,400 × g) ສໍາລັບ 1 min.
7. ຍົກເລີກຖັນ FastPure RNA.DNA/RNA ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການວິເຄາະຕໍ່ໄປ, ຫຼືເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -30 ~ -15 ° C ສໍາລັບໄລຍະເວລາສັ້ນຫຼື -85 ~ -65 ° C ສໍາລັບໄລຍະເວລາທີ່ຍາວກວ່າ.
ບັນທຶກ
ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ການຄົ້ນຄວ້າເທົ່ານັ້ນ.ບໍ່ແມ່ນເພື່ອໃຊ້ໃນຂັ້ນຕອນການວິນິດໄສ.
1. Equilibate ຕົວຢ່າງກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງລ່ວງຫນ້າ.
2. ເຊື້ອໄວຣັສແມ່ນຕິດເຊື້ອສູງ.ກະລຸນາຮັບປະກັນຄວາມລະມັດລະວັງດ້ານຄວາມປອດໄພທີ່ຈໍາເປັນທັງໝົດກ່ອນການທົດລອງ.
3. ຫຼີກລ່ຽງການແຊ່ເຢັນຊ້ຳໆ ແລະການເສື່ອມຕົວຂອງຕົວຢ່າງ, ເພາະວ່ານີ້ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການເຊື່ອມໂຊມ ຫຼືຫຼຸດຜົນຜະລິດຂອງ DNA/RNA ໄວຣັສທີ່ສະກັດອອກມາ.
4. ອຸປະກອນທີ່ກຽມພ້ອມດ້ວຍຕົນເອງປະກອບມີຄໍາແນະນໍາ pipette ທີ່ບໍ່ມີ RNase, 1.5 ml RNase-free centrifuge tubes, centrifuge, vortex mixer, ແລະ pipettes.
5. ເມື່ອໃຊ້ຊຸດດັ່ງກ່າວ, ໃຫ້ໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ, ຖົງມືຢາງທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້, ແລະຜ້າອັດດັງທີ່ຖິ້ມໄດ້ ແລະໃຊ້ອຸປະກອນບໍລິໂພກທີ່ບໍ່ມີ RNase ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ RNase.
6. ປະຕິບັດຂັ້ນຕອນທັງຫມົດໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງເວັ້ນເສຍແຕ່ໄດ້ລະບຸໄວ້ເປັນຢ່າງອື່ນ.
ກົນໄກ & ຂະບວນການເຮັດວຽກ
