Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG ຫຼື UDG) ເປັນໂຄນປະສົມຂອງ E.coli ທີ່ມີນໍ້າໜັກໂມເລກຸນ 25 kDa.ມັນກະຕຸ້ນການປ່ອຍ uracil ຟຣີຈາກ uracil-containing single-stranded and double-stranded DNA, and is inactive against RNA, and can be used to prevent PCR amplification products.ຫຼັກການຂອງການປະຕິບັດແມ່ນອີງໃສ່ຄວາມຈິງທີ່ວ່າຖ້າ dUTP ຖືກທົດແທນສໍາລັບ dTTP ໃນປະຕິກິລິຍາ PCR ແລະຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍ PCR ທີ່ມີຖານ dU ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ເອນໄຊສາມາດເລືອກແຍກພັນທະບັດ glycosidic ຂອງ U bases ໃນສາຍດຽວແລະສອງສາຍ. DNA ແລະທໍາລາຍຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍ PCR.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ແນະນໍາ
ການຂະຫຍາຍການປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນ
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
-20°C ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ, ຄວນປະສົມໃຫ້ດີກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້, ຫຼີກເວັ້ນການ freeze ເລື້ອຍໆ.
ພື້ນທີ່ເກັບຂໍ້ມູນ
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ປະລິມານຂອງເອນໄຊທີ່ຕ້ອງການໃນການຍ່ອຍສະຫຼາຍ 1µg ຂອງ DNA ສາຍດ່ຽວທີ່ມີຖານ dU ໃນ 1 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ແມ່ນ 1 ຫນ່ວຍ.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ electrophoretic SDS-PAGE ສູງກວ່າ 98%
2.ຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງການຂະຫຍາຍ, ການຄວບຄຸມ batch-to-batch, ຄວາມຫມັ້ນຄົງ
3.ຫຼັງຈາກ 1U ຂອງ UNG ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ 50 ℃ສໍາລັບ 2 ນາທີ, ແມ່ແບບທີ່ມີ U ຕ່ໍາກວ່າ 103 ສໍາເນົາຄວນຈະຖືກຊຸດໂຊມຫມົດແລະບໍ່ມີຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນ.
4.ບໍ່ມີກິດຈະກໍານິວເຄລຍ exogenous
ຄໍາແນະນໍາ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ (μL) | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| 10 × PCR Buffer (dNTP ຟຣີ, Mg²+ຟຣີ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 ມມ |
| dUTP (ແທນທີ່ dTTP) | - | 200-600 ມມ |
| 25 ມມ MgCl2 | 2-8 ມລ | 1-4 ມມ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 × Primer Mixກ | 2 | 1× |
| ແມ່ແບບ | - | ＜1μg/ປະຕິກິລິຍາ |
| ddH₂O | ເຖິງ 50 | - |
ຫມາຍເຫດ: a: ຖ້າໃຊ້ສໍາລັບ qPCR/qRT-PCR, ການສືບສວນ fluorescent ຄວນຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນລະບົບຕິກິຣິຍາ.ປົກກະຕິແລ້ວ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ primer ສຸດທ້າຍຂອງ 0.2 μMສາມາດໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີ;ໃນເວລາທີ່ການປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາບໍ່ດີ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ສາມາດປັບໄດ້ໃນລະດັບ 0.2-1 μM.ປົກກະຕິແລ້ວ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ probe ໄດ້ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີທີ່ສຸດໃນລະດັບ 0.1-0.3 μM.ການທົດລອງ gradient ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສາມາດປະຕິບັດເພື່ອຊອກຫາການປະສົມປະສານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ primer ແລະ probe.
ບັນທຶກ
1.ເອນໄຊ UNG ສາມາດນໍາໃຊ້ເພື່ອເອົາຜະລິດຕະພັນຂະຫຍາຍ dUTP ທີ່ປົນເປື້ອນອອກຈາກລະບົບປະຕິກິລິຢາກ່ອນທີ່ຈະມີປະຕິກິລິຍາຂະຫຍາຍ PCR, ຫຼັງຈາກນັ້ນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຍ້ອນການປົນເປື້ອນຂອງຜະລິດຕະພັນ.
2.ອຸນຫະພູມທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການ enzyme UNG ທີ່ຈະນໍາໃຊ້ໃນການຕ້ານການປົນເປື້ອນ PCR ຕິກິຣິຍາໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນ 50 ℃ສໍາລັບ 2mins;ສະພາບ inactivation ແມ່ນ 95 ℃ສໍາລັບ 5 ນາທີ.
3.ຫຼີກລ້ຽງການແຊ່ແຂງເລື້ອຍໆ, ແລະບໍ່ໃຫ້ມີການເຫນັງຕີງຂອງອຸນຫະພູມຂະຫນາດໃຫຍ່.
4.genes ທີ່ແຕກຕ່າງກັນທີ່ຈະຂະຫຍາຍໄດ້ມີປະສິດທິພາບການນໍາໃຊ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ dUTP ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ enzyme UNG, ດັ່ງນັ້ນ, ຖ້າການນໍາໃຊ້ລະບົບ UNG ນໍາໄປສູ່ການຫຼຸດລົງຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວໃນການກວດສອບ, ລະບົບຕິກິຣິຍາຄວນໄດ້ຮັບການປັບແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບ, ຖ້າທ່ານຕ້ອງການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານວິຊາການ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່. ບໍລິສັດຂອງພວກເຮົາ.
