Universal SYBR GREEN qPCR Premix (ສີຟ້າ)

ໝາຍເລກແມວ: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) ແມ່ນການແກ້ໄຂເບື້ອງຕົ້ນສໍາລັບການຂະຫຍາຍ PCR ປະລິມານ 2 ×ເວລາຈິງທີ່ມີລັກສະນະທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວແລະຄວາມສະເພາະສູງ, ເປັນສີຟ້າ, ແລະມີຜົນກະທົບຂອງການເພີ່ມເຕີມຕົວຢ່າງ.ອົງປະກອບຫຼັກຂອງ Taq DNA polymerase ໃຊ້ antibody hot start ເພື່ອຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະຢ່າງມີປະສິດທິພາບເນື່ອງຈາກ primer annealing ໃນລະຫວ່າງການກະກຽມຕົວຢ່າງ.ໃນເວລາດຽວກັນ, ສູດເພີ່ມປັດໃຈສົ່ງເສີມເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຂອງຕິກິຣິຍາ PCR ແລະຄວາມສະເຫມີພາບການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາທີ່ມີເນື້ອໃນ GC ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (30 ~ 70%), ດັ່ງນັ້ນ PCR ດ້ານປະລິມານສາມາດໄດ້ຮັບຄວາມສໍາພັນເສັ້ນຊື່ທີ່ດີໃນປະລິມານກວ້າງ. ພາກພື້ນ.ຜະລິດຕະພັນນີ້ປະກອບດ້ວຍສີຍ້ອມຜ້າອ້າງອິງ ROX Passive ພິເສດ, ເຊິ່ງສາມາດໃຊ້ໄດ້ກັບເຄື່ອງມື qPCR ສ່ວນໃຫຍ່.ມັນບໍ່ຈໍາເປັນທີ່ຈະປັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ ROX ໃນເຄື່ອງມືທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນທີ່ຈະເພີ່ມ primers ແລະແມ່ແບບເພື່ອກະກຽມລະບົບຕິກິຣິຍາສໍາລັບການຂະຫຍາຍ.

ອົງປະກອບ

Universal Blue qPCR Master Mix

ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ

ຜະລິດຕະພັນໄດ້ຖືກຂົນສົ່ງດ້ວຍຖົງກ້ອນແລະສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ℃ ~ -15 ℃ສໍາລັບ 18 ເດືອນ.ມັນເປັນສິ່ງຈໍາເປັນເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ irradiation ແສງສະຫວ່າງທີ່ເຂັ້ມແຂງໃນເວລາທີ່ເກັບຮັກສາຫຼືກະກຽມລະບົບຕິກິຣິຍາ.

ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ

ຄໍາແນະນໍາ

1.ລະບົບປະຕິກິລິຍາ

[ໝາຍເຫດ]: ປະສົມໃຫ້ສະອາດກ່ອນນຳໃຊ້ເພື່ອບໍ່ໃຫ້ເກີດຟອງຫຼາຍເກີນໄປຈາກການສັ່ນຢ່າງແຮງ.

a) ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ primer: ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ primer ສຸດທ້າຍແມ່ນ 0.2μmol / L, ແລະຍັງສາມາດປັບໄດ້ລະຫວ່າງ 0.1 ແລະ 1.0μmol / L ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ.

b) ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງແມ່ແບບ: ຖ້າແມ່ແບບແມ່ນການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບ cDNA undiluted, ປະລິມານທີ່ໃຊ້ບໍ່ຄວນເກີນ 1/10 ຂອງປະລິມານທັງຫມົດຂອງປະຕິກິລິຍາ qPCR.

c) ການເຈືອຈາງແມ່ແບບ: ແນະນໍາໃຫ້ເຈືອຈາງການແກ້ໄຂຫຼັກຊັບ cDNA ໂດຍ 5-10 ເທື່ອ.ປະລິມານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງແມ່ແບບທີ່ເພີ່ມແມ່ນດີກວ່າເມື່ອຄ່າ Ct ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍການຂະຫຍາຍແມ່ນ 20-30 ຮອບ.

d) ລະບົບປະຕິກິລິຍາ: ແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ 20μL ຫຼື 50μL ເພື່ອຮັບປະກັນປະສິດທິພາບແລະການເຮັດຊ້ໍາຄືນຂອງການຂະຫຍາຍ gene ເປົ້າຫມາຍ.

e) ການກະກຽມລະບົບ: ກະລຸນາກະກຽມໃນ bench ທີ່ສະອາດ super ແລະນໍາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາແລະທໍ່ຕິກິຣິຍາໂດຍບໍ່ມີການ residue nuclease;ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຄໍາແນະນໍາກັບໄສ້ຕອງການກັ່ນຕອງ.ຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂ້າມແລະການປົນເປື້ອນ aerosol.

2.ໂຄງການປະຕິກິລິຍາ

ໂຄງການມາດຕະຖານ

ໂຄງການດ່ວນ

[ຫມາຍ​ເຫດ​]​: ໂຄງ​ການ​ໄວ​ແມ່ນ​ເຫມາະ​ສົມ​ສໍາ​ລັບ​ສ່ວນ​ໃຫຍ່​ຂອງ genes​, ແລະ​ໂຄງ​ການ​ມາດ​ຕະ​ຖານ​ສາ​ມາດ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ທົດ​ລອງ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ສະ​ລັບ​ສັບ​ຊ້ອນ​ຂອງ​ບຸກ​ຄົນ​ໂຄງ​ປະ​ກອບ​ການ​ຂັ້ນ​ສອງ genes​.

a) ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ແລະ​ເວ​ລາ​ຂອງ​ການ Annealing​: ກະ​ລຸ​ນາ​ປັບ​ຕາມ​ຄວາມ​ຍາວ​ຂອງ primer ແລະ gene ເປົ້າ​ຫມາຍ​.

b) ການໄດ້ຮັບສັນຍານ Fluorescence (★): ກະລຸນາກໍານົດຂັ້ນຕອນການທົດລອງຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນຄໍາແນະນໍາສໍາລັບການນໍາໃຊ້ເຄື່ອງມື.

c) ເສັ້ນໂຄ້ງ melting: ໂປຣແກຣມເລີ່ມຕົ້ນຂອງເຄື່ອງມືສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ຕາມປົກກະຕິ.

3. ການວິເຄາະຜົນໄດ້ຮັບ 

ຢ່າງໜ້ອຍຕ້ອງມີການຈຳລອງທາງຊີວະພາບສາມອັນສຳລັບການທົດລອງດ້ານປະລິມານ.ຫຼັງຈາກປະຕິກິລິຍາ, ເສັ້ນໂຄ້ງຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນແລະເສັ້ນໂຄ້ງ melting ຕ້ອງໄດ້ຮັບການຢືນຢັນ.

3.1 ເສັ້ນໂຄ້ງການຂະຫຍາຍ:

ເສັ້ນໂຄ້ງການຂະຫຍາຍມາດຕະຖານແມ່ນຮູບຊົງ S.ການວິເຄາະປະລິມານແມ່ນຖືກຕ້ອງທີ່ສຸດເມື່ອຄ່າ Ct ຫຼຸດລົງລະຫວ່າງ 20 ຫາ 30. ຖ້າຄ່າ Ct ຫນ້ອຍກວ່າ 10, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງເຈືອຈາງແມ່ແບບແລະປະຕິບັດການທົດສອບອີກເທື່ອຫນຶ່ງ.ເມື່ອຄ່າ Ct ຢູ່ໃນລະຫວ່າງ 30-35, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແມ່ແບບຫຼືປະລິມານຂອງລະບົບປະຕິກິລິຍາ, ເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍແລະຮັບປະກັນຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງການວິເຄາະຜົນໄດ້ຮັບ.ເມື່ອຄ່າ Ct ສູງກວ່າ 35, ຜົນການທົດສອບບໍ່ສາມາດວິເຄາະປະລິມານການສະແດງອອກຂອງ gene ໄດ້, ແຕ່ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອການວິເຄາະຄຸນນະພາບ.

3.2 ເສັ້ນ​ໂຄ້ງ​ການ​ລະ​ລາຍ​:

ຈຸດສູງສຸດດຽວຂອງເສັ້ນໂຄ້ງ melting ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມສະເພາະຂອງຕິກິຣິຍາແມ່ນດີແລະການວິເຄາະປະລິມານສາມາດປະຕິບັດໄດ້;ຖ້າເສັ້ນໂຄ້ງການລະລາຍສະແດງໃຫ້ເຫັນຈຸດສູງສຸດສອງເທົ່າຫຼືຫຼາຍ, ການວິເຄາະປະລິມານບໍ່ສາມາດປະຕິບັດໄດ້.ເສັ້ນໂຄ້ງ melting ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຈຸດສູງສຸດສອງເທົ່າ, ແລະມັນຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ຕັດສິນວ່າຈຸດສູງສຸດທີ່ບໍ່ແມ່ນເປົ້າຫມາຍແມ່ນ primer dimer ຫຼືການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະໂດຍ DNA agarose gel electrophoresis.ຖ້າມັນເປັນ primer dimer, ແນະນໍາໃຫ້ຫຼຸດຜ່ອນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ຫຼືອອກແບບ primers ທີ່ມີປະສິດຕິພາບສູງ.ຖ້າມັນເປັນການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະ, ກະລຸນາເພີ່ມອຸນຫະພູມການຫມູນວຽນ, ຫຼືອອກແບບ primers ຄືນໃໝ່ດ້ວຍຄວາມສະເພາະ.

ບັນທຶກ

ກະລຸນາໃສ່ PPE ທີ່ຈໍາເປັນ, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງແລະຖົງມື, ເພື່ອຮັບປະກັນສຸຂະພາບແລະຄວາມປອດໄພຂອງທ່ານ!

ຜະ​ລິດ​ຕະ​ພັນ​ນີ້​ແມ່ນ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​ການ​ຄົ້ນ​ຄວ້າ​ເທົ່າ​ນັ້ນ​!