ອຸນຫະພູມທີ່ລະອຽດອ່ອນ UNG
ອຸນຫະພູມທີ່ອ່ອນໄຫວ UNG (TS-UNG) ແມ່ນໄດ້ຮັບໂດຍການສະແດງອອກ recombinant ໃນ E. coli.enzyme ກະຕຸ້ນການປ່ອຍ uracil ຟຣີຈາກ DNA ທີ່ມີສາຍດຽວແລະສອງສາຍ uracil ແລະບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ RNA.ເມື່ອປຽບທຽບກັບ enzyme UNG ທຳ ມະດາຂອງຕົ້ນ ກຳ ເນີດຂອງ gene E. coli, ເອນໄຊ TS-UNG ມີກິດຈະ ກຳ ທີ່ສູງກວ່າໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າ (20 ℃ ~ 37 ℃) ແລະມີອຸນຫະພູມທີ່ອ່ອນໄຫວແລະບໍ່ເປີດໃຊ້ງານໄດ້ງ່າຍ (50 ℃), ຫຼີກເວັ້ນການເຊື່ອມໂຊມຂອງເຄື່ອງຂະຫຍາຍທີ່ມີ dUTP. ຜະລິດຕະພັນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງໂດຍກິດຈະກໍາທີ່ຕົກຄ້າງທີ່ອາດຈະຍັງຄົງຢູ່ຫຼັງຈາກການກະຕຸ້ນຂອງ enzyme UNG ທໍາມະດາ.ດັ່ງນັ້ນ, ເອນໄຊ TS-UNG ບໍ່ພຽງແຕ່ເຫມາະສົມສໍາລັບປະຕິກິລິຍາປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນ PCR, ແຕ່ຍັງກົງກັບໂຄງການຂະຫຍາຍ RT-PCR ແລະສາມາດນໍາໃຊ້ໃນປະຕິກິລິຍາປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນຂອງ RT-PCR.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ແນະນໍາ
ການຂະຫຍາຍການປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນ
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
-20°C ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວ, ຄວນປະສົມໃຫ້ດີກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້, ຫຼີກເວັ້ນການ freeze ເລື້ອຍໆ.
ພື້ນທີ່ເກັບຂໍ້ມູນ
20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ປະລິມານຂອງເອນໄຊທີ່ຕ້ອງການໃນການຍ່ອຍສະຫຼາຍ 1µg ຂອງ DNA ສາຍດ່ຽວທີ່ມີຖານ dU ໃນ 1 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ແມ່ນ 1 ຫນ່ວຍງານ (U).
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.ຄວາມບໍລິສຸດຂອງ electrophoretic SDS-PAGE ສູງກວ່າ 98%
2.ກິດຈະກໍາການເຊື່ອມໂຊມ, batch-to-batch ການຄວບຄຸມ, ຄວາມຫມັ້ນຄົງ
3.ບໍ່ມີກິດຈະກໍານິວເຄລຍ exogenous, ບໍ່ມີ endonuclease exogenous ຫຼື exonuclease ການປົນເປື້ອນ.
ຄໍາແນະນໍາ
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ (μL) | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| 10 × PCR Buffer (dNTP ຟຣີ, Mg²+ຟຣີ) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 ມມ |
| dUTP (ແທນທີ່ dTTP) | - | 200-600 ມມ |
| 25 ມມ MgCl2 | 2-8 ມລ | 1-4 ມມ |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixກ | 2 | 1× |
| ແມ່ແບບ | - | ＜1μg/ປະຕິກິລິຍາ |
| ddH₂O | ເຖິງ 50 | - |
ໝາຍເຫດ: a: ຖ້າໃຊ້ກັບ qPCR/qRT-PCR, ຄວນເພີ່ມເຄື່ອງກວດ fluorescent ເຂົ້າໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາ.ປົກກະຕິແລ້ວ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ primer ສຸດທ້າຍຂອງ 0.2 μMສາມາດໃຫ້ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີ;ໃນເວລາທີ່ການປະຕິບັດປະຕິກິລິຍາບໍ່ດີ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ສາມາດປັບໄດ້ໃນລະດັບ 0.2-1 μM.ປົກກະຕິແລ້ວ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ probe ໄດ້ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີທີ່ສຸດໃນລະດັບ 0.1-0.3 μM.ການທົດລອງ gradient ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສາມາດປະຕິບັດເພື່ອຊອກຫາການປະສົມປະສານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ primer ແລະ probe.
ບັນທຶກ
1.ອຸນຫະພູມຕິກິຣິຍາທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ enzyme TS-UNG ແມ່ນຂ້ອນຂ້າງຕ່ໍາ, ແລະມັນສາມາດໄດ້ຮັບການປັບໃຫ້ເຫມາະສົມໃນລະດັບ 20 ℃ ~ 37 ℃, ປະລິມານຂອງ enzyme ແລະທີ່ໃຊ້ເວລາຕິກິຣິຍາສາມາດໄດ້ຮັບການປັບປຸງໃນລະດັບ 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 ນາທີ;ແລະ enzyme ສາມາດ inactivated ໃນຂະບວນການຂອງ reverse transcription ໄດ້.
2.ມັນເຫມາະສົມສໍາລັບ PCR ແລະ RT-PCR ເພື່ອປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນ.
3.ຫຼີກລ້ຽງການແຊ່ແຂງເລື້ອຍໆ, ແລະບໍ່ໃຫ້ມີການເຫນັງຕີງຂອງອຸນຫະພູມຂະຫນາດໃຫຍ່.
4.genes ທີ່ແຕກຕ່າງກັນທີ່ຈະຂະຫຍາຍໄດ້ມີປະສິດທິພາບການນໍາໃຊ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ dUTP ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ enzyme UNG, ດັ່ງນັ້ນ, ຖ້າການນໍາໃຊ້ລະບົບ UNG ນໍາໄປສູ່ການຫຼຸດລົງຂອງຄວາມອ່ອນໄຫວໃນການກວດສອບ, ລະບົບຕິກິຣິຍາຄວນໄດ້ຮັບການປັບແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບ, ຖ້າທ່ານຕ້ອງການສະຫນັບສະຫນູນດ້ານວິຊາການ, ກະລຸນາຕິດຕໍ່. ບໍລິສັດຂອງພວກເຮົາ.
