Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) ແມ່ນ polypeptide ສາຍດຽວທີ່ມີ 4 ພັນທະບັດ disulfide ທີ່ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນປະມານ 13.7 kDa.RNase A ແມ່ນ endoribonuclease ທີ່ degrades ໂດຍສະເພາະ RNA ສາຍດຽວຢູ່ທີ່ C ແລະ U residues.ໂດຍສະເພາະ, ການແຕກແຍກຮັບຮູ້ພັນທະບັດ phosphodiester ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ 5′-ribose ຂອງ nucleotide ແລະກຸ່ມ phosphate ຢູ່ໃນ 3′-ribose ຂອງ pyrimidine nucleotide ທີ່ຕິດກັນ, ດັ່ງນັ້ນ 2, 3′--Cyclic phosphates ຖືກ hydrolyzed ກັບ 3 ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ. ຟອສເຟດ nucleoside (ເຊັ່ນ: pG-pG-pC-pA-pG ຖືກແຍກອອກໂດຍ RNase A ເພື່ອສ້າງ pG-pG-pCp ແລະ A-PG).RNase A ແມ່ນການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສຸດໃນການຕັດ RNA ເສັ້ນດ່ຽວ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການເຮັດວຽກທີ່ແນະນໍາແມ່ນ 1-100μG / mL, ເຫມາະສົມກັບລະບົບປະຕິກິລິຍາຕ່າງໆ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເກືອຕ່ໍາ (0-100 mM NaCl) ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຕັດ RNA ສາຍດຽວ, RNA ສອງສາຍ, ແລະຕ່ອງໂສ້ RNA ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍການປະສົມ RNA-DNA.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເກືອສູງ (≥0.3 M), RNase A ພຽງແຕ່ແຍກ RNA ເສັ້ນດ່ຽວ.
RNase A ຖືກນໍາໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດເພື່ອເອົາ RNA ໃນລະຫວ່າງການກະກຽມ plasmid DNA ຫຼື DNA genomic. ບໍ່ວ່າຈະ DNase ມີການເຄື່ອນໄຫວໃນລະຫວ່າງຂະບວນການກະກຽມສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ປະຕິກິລິຢາໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍ.ວິທີການແບບດັ້ງເດີມຂອງການຕົ້ມໃນອາບນ້ໍາສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອ inactivate DNase ກິດຈະກໍາ.ຜະລິດຕະພັນນີ້ບໍ່ມີ DNase ແລະ protease, ແລະບໍ່ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປິ່ນປົວຄວາມຮ້ອນກ່ອນການນໍາໃຊ້.ນອກຈາກນັ້ນ, ຜະລິດຕະພັນນີ້ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການທົດລອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນເຊັ່ນການວິເຄາະການປ້ອງກັນ RNase ແລະການວິເຄາະລໍາດັບ RNA.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ຜະລິດຕະພັນສາມາດເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25～-15℃, ມີອາຍຸ 2 ປີ.
ຄໍາແນະນໍາ
ນີ້ແມ່ນ ໜຶ່ງ ໃນວິທີການທົ່ວໄປໃນການກະກຽມການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNase A.ມັນຍັງສາມາດກະກຽມໂດຍວິທີການອື່ນໆຕາມວິທີການພື້ນເມືອງໃນຫ້ອງທົດລອງຫຼືວັນນະຄະດີອ້າງອີງ (ເຊັ່ນ:ການລະລາຍໂດຍກົງໃນ 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ຫຼືການແກ້ໄຂ Tris-NaCl)
1. ໃຊ້ 10 mM sodium acetate (pH 5.2) ເພື່ອກະກຽມການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNase A 10 mg/mL.
2. ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 100 ℃ສໍາລັບ 15 min
3. ເຢັນກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ເພີ່ມປະລິມານ 1/10 ຂອງ 1 M Tris-HCl (pH 7.4), ປັບ pH ຂອງຕົນເປັນ 7.4 (ສໍາລັບ.ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມ 500 ml ຂອງ 10g/ml ການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. ການຫຸ້ມຫໍ່ຍ່ອຍຢູ່ທີ່ -20 ℃ສໍາລັບການເກັບຮັກສາ frozen, ເຊິ່ງສາມາດມີຄວາມຫມັ້ນຄົງໄດ້ເຖິງ 2 ປີ.
[ຫມາຍເຫດ]: ໃນເວລາທີ່ຕົ້ມການແກ້ໄຂ RNaseA ພາຍໃຕ້ສະພາບທີ່ເປັນກາງ, precipitation RNase ຈະປະກອບເປັນ;ຕົ້ມມັນຢູ່ໃນ pH ຕ່ໍາ, ແລະຖ້າຫາກວ່າມີ precipitation, ມັນສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້, ເຊິ່ງອາດຈະເກີດຈາກການມີທາດໂປຼຕີນຈາກ impurities.ຖ້າພົບຂີ້ຕົມຫຼັງຈາກຕົ້ມແລ້ວ, ສິ່ງສົກກະປົກສາມາດເອົາອອກໄດ້ໂດຍການ centrifugation ຄວາມໄວສູງ (13000rpm), ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນບັນຈຸຍ່ອຍສໍາລັບການເກັບຮັກສາ freezing.
ຂໍ້ມູນຜະລິດຕະພັນ
| ຄຳສັບຄ້າຍຄືກັນ | Ribonuclease I;Pancreatic ribonuclease;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| ຮູບລັກສະນະ | ຜົງ lyophilized ສີຂາວ |
| ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ | ~ 13.7kDa (ລໍາດັບອາຊິດ amino) |
| ຄ່າ Ph | 7.6 (ຊ່ວງກິດຈະກຳ 6-10) |
| ອຸນຫະພູມທີ່ເຫມາະສົມ | 60℃ (ຊ່ວງກິດຈະກໍາ 15-70℃) |
| ກຳລັງເປີດໃຊ້ຕົວແທນ | Na2+.ຄ+ |
| ຢາຍັບຍັ້ງ | Rnase inhibitor |
| ວິທີການເປີດໃຊ້ງານ | ບໍ່ສາມາດ inactivated ໂດຍການເຮັດໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ, ມັນແມ່ນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ຖັນ centrifuge |
| ຕົ້ນກໍາເນີດ | ໂບວີ |
| ການລະລາຍ | ລະລາຍໃນນ້ໍາ (10mg / ml) |
| ການສູນເສຍແຫ້ງແລ້ງ | ≤5.0% |
| ກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊ | ≥60 Kunitz units/mg |
| ຈຸດ isoelectric | 9.6 |
ບັນທຶກ
ເພື່ອຄວາມປອດໄພ ແລະສຸຂະພາບຂອງເຈົ້າ, ກະລຸນາໃສ່ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະຖົງມືທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້.
