DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
ໝາຍເລກແມວ: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) ແມ່ນ endodeoxyribonuclease ທີ່ສາມາດຍ່ອຍສະຫຼາຍ DNA ດຽວຫຼືສອງສາຍ.ມັນຮັບຮູ້ແລະຕັດພັນທະບັດ phosphodiester ເພື່ອຜະລິດ monodeoxynucleotides ຫຼື oligodeoxynucleotides ດຽວຫຼືສອງສາຍທີ່ມີກຸ່ມຟອສເຟດຢູ່ທີ່ 5'-terminal ແລະ hydroxyl ຢູ່ທີ່ 3'-terminal.ກິດຈະກໍາຂອງ DNase I ແມ່ນຂຶ້ນກັບ Ca2+ແລະສາມາດໄດ້ຮັບການກະຕຸ້ນໂດຍ ions ໂລຫະ divalent ເຊັ່ນ Mn2+ແລະ Zn2+.5 mM Ca2+ປົກປ້ອງ enzyme ຈາກ hydrolysis.ໃນທີ່ປະທັບຂອງ Mg2+, ເອນໄຊສາມາດສຸ່ມຮັບຮູ້ແລະແຍກສະຖານທີ່ໃດນຶ່ງໃນສາຍຂອງ DNA.ໃນທີ່ປະທັບຂອງ Mn2+, ສາຍສອງຂອງ DNA ສາມາດຖືກຮັບຮູ້ພ້ອມໆກັນແລະຖືກຕັດຢູ່ໃນເກືອບສະຖານທີ່ດຽວກັນເພື່ອສ້າງເປັນຊິ້ນສ່ວນ DNA ປາຍຮາບພຽງຫຼືຊິ້ນ DNA ປາຍຫນຽວທີ່ມີ 1-2 nucleotides protruding.
ອົງປະກອບ
| ຊື່ | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, ບໍ່ມີ RNase | 20μL | 200μL | 1 ມລ | 10 ມລ |
| 10×DNase I Buffer | 1 ມລ | 1 ມລ | 5 × 1 ມລ | 5×10 ມລ |
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
-25℃ ~ -15℃ ສໍາລັບການເກັບຮັກສາ;ການຂົນສົ່ງພາຍໃຕ້ຊອງກ້ອນ.
ຄໍາແນະນໍາ
1. ກະກຽມການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາໃນທໍ່ທີ່ບໍ່ມີ RNase ຕາມອັດຕາສ່ວນທີ່ລະບຸໄວ້ຂ້າງລຸ່ມນີ້:
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, ບໍ່ມີ RNase (5U/μL) | 1 U ຕໍ່ µg RNA① |
| ddH2O | ເຖິງ 10μL |
ຫມາຍເຫດ: ①ຄິດໄລ່ປະລິມານຂອງ DNase I ທີ່ຕ້ອງການເພີ່ມໂດຍອີງໃສ່ຈໍານວນ RNA.
2. 37 ℃ 15 ນາທີ;
3. ເພີ່ມ 0.5M EDTA ກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 2.5mM ~ 5mM, ແລະໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 65 ℃ສໍາລັບ 10 ນາທີເພື່ອຢຸດຕິກິຣິຍາ.ຕົວຢ່າງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການຕິກິຣິຍາຕໍ່ໄປເຊັ່ນ: reverse transcriptionການທົດລອງ.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງແມ່ນຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນເອນໄຊທີ່ຈະທໍາລາຍ 1µg ຂອງ pBR322 ຢ່າງສົມບູນDNA ໃນ 10 ນາທີທີ່ 37 ℃.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
RNase:5U ຂອງ DNase I ກັບ 1.6µg MS2 RNA ເປັນເວລາ 4 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ ຜົນຜະລິດບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມ.ກໍານົດໂດຍ electrophoresis gel agarose.
ບັນທຶກ
1. ກະລຸນາກະກຽມ 0.5MEDTA ດ້ວຍຕົວທ່ານເອງ.
2. ໃຊ້ 1U DNase I ຕໍ່ µg ຂອງ RNA.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຖ້າ RNA ຫນ້ອຍກວ່າ 1µg, ກະລຸນາໃຊ້ 1U DNase I.
3. ກະລຸນາວາງ enzyme ເທິງກ້ອນໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ.
