ຊຸດ CHO HCP ELISA
ວິທີການ Immunosorbent ELISA ຂັ້ນຕອນດຽວແມ່ນຖືກນໍາໃຊ້ໃນການວິເຄາະນີ້.ຕົວຢ່າງທີ່ບັນຈຸ CHOK1 HCP ພ້ອມກັນປະຕິກິລິຍາກັບພູມຕ້ານທານແບ້ທີ່ມີປ້າຍຊື່ HRP ແລະຕ້ານ CHOK1 ແອນຕິບໍດີທີ່ເຄືອບຢູ່ເທິງແຜ່ນ ELISA, ສຸດທ້າຍກໍ່ເປັນສະລັບສັບຊ້ອນແຊນວິດຂອງພູມຕ້ານທານທີ່ມີປ້າຍກຳກັບ anti-HCP ໄລຍະແຂງ.ພູມຕ້ານທານທີ່ບໍ່ຜູກມັດສາມາດເອົາອອກໄດ້ໂດຍການລ້າງແຜ່ນ ELISA.substrate TMB ຖືກເພີ່ມໃສ່ນ້ໍາດີສໍາລັບການຕິກິຣິຍາພຽງພໍ.ການພັດທະນາສີແມ່ນຢຸດເຊົາຫຼັງຈາກເພີ່ມການແກ້ໄຂການຢຸດເຊົາ, ແລະຄ່າ OD ຫຼືການດູດຊຶມຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາຢູ່ທີ່ 450/650nm ຖືກອ່ານດ້ວຍເຄື່ອງອ່ານ microplate.ຄ່າ OD ຫຼືຄ່າດູດຊຶມແມ່ນອັດຕາສ່ວນກັບເນື້ອໃນ HCP ໃນການແກ້ໄຂ.ຈາກນີ້, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ HCP ໃນການແກ້ໄຂສາມາດຖືກຄິດໄລ່ຕາມເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ.
ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
ຊຸດນີ້ຖືກໃຊ້ເພື່ອກວດຫາປະລິມານຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກເຊລໂຮສ CHOK1 ໃນຕົວຢ່າງ.
Cອົງປະກອບ
| S/N | ອົງປະກອບ | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ | ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ |
| 1 | ມາດຕະຖານ CHOK1 HCP | 0.5 ມກ/ມລ | ≤–20℃ |
| 2 | ຕ້ານ CHO HCP-HRP | 0.5 ມກ/ມລ | ≤–20℃, ປົກປັກຮັກສາຈາກແສງສະຫວ່າງ |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, ປົກປັກຮັກສາຈາກແສງສະຫວ່າງ |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | ຢຸດການແກ້ໄຂ | NA | RT |
| 6 | ເຄື່ອງຜະນຶກ Microplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | ແຜ່ນທີ່ດູດຊຶມສູງກ່ອນການເຄືອບ | NA | 2-8℃ |
ອຸປະກອນທີ່ຕ້ອງການ
| ເຄື່ອງບໍລິໂພກ / ອຸປະກອນ | ຜະລິດ | ລາຍການ |
| ເຄື່ອງອ່ານ Microplate | ອຸປະກອນໂມເລກຸນ | Spectra Max M5, M5e, ຫຼືທຽບເທົ່າ |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, ຫຼືທຽບເທົ່າ |
| ເຄື່ອງປະສົມ Vortex | IKA | MS3 Digital, ຫຼືທຽບເທົ່າ |
ການເກັບຮັກສາແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງ
1.ການຂົນສົ່ງຢູ່ທີ່ -25 ~ -15 ° C.
2.ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1;ອົງປະກອບ 1-2 ຖືກເກັບໄວ້ ≤–20°C,5-6 ຖືກເກັບໄວ້ RT,3,4,7,8 ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 2-8 ℃;ໄລຍະເວລາທີ່ຖືກຕ້ອງແມ່ນ 12 ເດືອນ.
ຕົວກໍານົດການຜະລິດຕະພັນ
1.ຄວາມອ່ອນໄຫວ: 1ng/mL
2.ລະດັບການກວດພົບ: 3- 100ng/mL
3.ຄວາມຊັດເຈນ: Intra-assay CV≤ 10%, inter- assay CV≤ 15%
4.ການຄຸ້ມຄອງ HCP: > 80%
5.ສະເພາະ: ຊຸດນີ້ແມ່ນທົ່ວໄປຍ້ອນວ່າມັນເຮັດປະຕິກິລິຍາໂດຍສະເພາະກັບ CHOK1 HCP ທີ່ບໍ່ຂຶ້ນກັບຂະບວນການເຮັດຄວາມສະອາດ.
ການກະກຽມ Reagent
1.PBST 0.05%
ເອົາ 15 ml ຂອງ 20 × PBST 0.05%, ເຈືອຈາງໃນ ddH2O, ແລະເຮັດໄດ້ເຖິງ 300 ml.
2.1.0% BSA
ເອົາ BSA 1g ຂອງຂວດແລະເຈືອຈາງໃນ 100 ml ຂອງ PBST 0.05%, ປົນກັນຈົນກ່ວາລະລາຍຫມົດ, ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ 2-8 ° C.ບັຟເຟີການເຈືອຈາງທີ່ກຽມໄວ້ແມ່ນໃຊ້ໄດ້ເປັນເວລາ 7 ມື້.ແນະນໍາໃຫ້ກະກຽມຕາມຄວາມຕ້ອງການ.
3.ການແກ້ໄຂການກວດສອບ 2μg / mL
ເອົາ 48μL ຂອງ 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP ແລະເຈືອຈາງໃນ 11,952μL ຂອງ 1% BSA ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍຂອງການແກ້ໄຂການກວດພົບ 2μg/mL.
4.QC ແລະການກະກຽມມາດຕະຖານ CHOK1 HCP
| ທໍ່ ບໍ່. | ຕົ້ນສະບັບ | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ | ປະລິມານ | 1%BSA | ປະລິມານທັງໝົດ | ສຸດທ້າຍ |
| A | ມາດຕະຖານ | 0.5 ມກ/ມລ | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | ໑໗໕ | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
ຕາຕະລາງ: ການກະກຽມ QC ແລະມາດຕະຖານ
ຂັ້ນຕອນການວິເຄາະ
1.ກະກຽມ reagents ຕາມທີ່ລະບຸໄວ້ໃນ "ການກະກຽມ Reagent" ຂ້າງເທິງ.
2.ເອົາ 50μL ຂອງມາດຕະຖານ, ຕົວຢ່າງແລະ QCs (ຕາມຕາຕະລາງ 3) ເຂົ້າໄປໃນແຕ່ລະດີ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຕື່ມ 100μL ຂອງການແກ້ໄຂການຊອກຄົ້ນຫາ (2μg / mL);ກວມເອົາແຜ່ນທີ່ມີເຄື່ອງປະທັບຕາ, ແລະວາງແຜ່ນ ELISA ໃສ່ເຄື່ອງເຮັດຄວາມຮ້ອນ.ອົບຢູ່ທີ່ 500 rpm, 25 ± 3 ℃ສໍາລັບ 2 ຊົ່ວໂມງ.
3.ປີ້ນແຜ່ນ microplate ໃນບ່ອນຫລົ້ມຈົມແລະປະຖິ້ມການແກ້ໄຂການເຄືອບ.Pipette 300μL ຂອງ PBST 0.05% ເຂົ້າໄປໃນນໍ້າສ້າງແຕ່ລະຄົນເພື່ອລ້າງແຜ່ນ ELISA ແລະຖິ້ມການແກ້ໄຂ, ແລະເຮັດຊ້ໍາອີກ 3 ເທື່ອ.ປີ້ນຈານໃສ່ຜ້າເຊັດເຈ້ຍສະອາດ ແລະ ເຊັດໃຫ້ແຫ້ງ.
4.ຕື່ມ 100μL ofTMB substrate (ເບິ່ງຕາຕະລາງ 1) ໃສ່ແຕ່ລະຫນອງ, ຜະນຶກເຂົ້າກັບແຜ່ນ ELISA, ແລະ incubate ໃນຄວາມມືດທີ່ 25 ± 3 ℃ສໍາລັບ 15 ນາທີ.
5.Pipette 100μL ຂອງການແກ້ໄຂຢຸດເຂົ້າໄປໃນແຕ່ລະນ້ໍາ.
6.ວັດແທກການດູດຊຶມຢູ່ທີ່ຄວາມຍາວຄື້ນ 450/650nm ດ້ວຍຕົວອ່ານ microplate.
7.ວິເຄາະຂໍ້ມູນໂດຍ SoftMax ຫຼືຊອບແວທຽບເທົ່າ.ແຜນຜັງເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານໂດຍໃຊ້ຕົວແບບການຖົດຖອຍຂອງ logistic ສີ່ພາລາມິເຕີ.
ຕົວຢ່າງເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ
ຫມາຍເຫດ: ຖ້າຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ HCP ໃນຕົວຢ່າງເກີນຂອບເຂດຈໍາກັດເທິງຂອງເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ, ມັນຈໍາເປັນຕ້ອງໄດ້ເຈືອຈາງຢ່າງຖືກຕ້ອງກັບ buffer dilution ກ່ອນທີ່ຈະທົດສອບ.
ໝາຍເຫດ
ການແກ້ໄຂການຢຸດເຊົາແມ່ນ 2M ອາຊິດຊູນຟູຣິກ, ກະລຸນາຈັດການດ້ວຍຄວາມລະມັດລະວັງເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການ splashing!
