Rnase A
Ribonuclease A(RNaseA) ແມ່ນ polypeptide ສາຍດຽວທີ່ມີ 4 ພັນທະບັດ disulfide ທີ່ມີນ້ໍາຫນັກໂມເລກຸນປະມານ 13.7 kDa.RNase Ais ເປັນ endoribonuclease ທີ່ degrades ໂດຍສະເພາະ RNA ສາຍດຽວຢູ່ທີ່ C ແລະ U residues.ໂດຍສະເພາະ, ການແຕກແຍກຮັບຮູ້ພັນທະບັດ phosphodiester ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍ 5'-ribose ຂອງ nucleotide ແລະກຸ່ມ phosphate ໃນ 3'-ribose ຂອງ pyrimidine nucleotide ທີ່ຕິດກັນ, ດັ່ງນັ້ນ phosphates 2,3'-Cyclic ໄດ້ຖືກ hydrolyzed ກັບ 3 ທີ່ສອດຄ້ອງກັນ. 'nucleoside phosphates (ຕົວຢ່າງ: pG-pG-pC-pA-pG ຖືກຕັດໂດຍ RNase A ເພື່ອສ້າງ pG-pG-pCp ແລະ A-PG).RNase A ແມ່ນການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສຸດໃນການຕັດ RNA ເສັ້ນດ່ຽວ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການເຮັດວຽກທີ່ແນະນໍາແມ່ນ 1- 100 μ G / mL, ເຫມາະສົມກັບລະບົບປະຕິກິລິຍາຕ່າງໆ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເກືອຕ່ໍາ (0-100 mM NaCl) ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຕັດ RNA ສາຍດຽວ, RNA ສອງສາຍ, ແລະຕ່ອງໂສ້ RNA ທີ່ສ້າງຂຶ້ນໂດຍການປະສົມ RNA-DNA.
ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເກືອສູງ (≥0.3 M), RNase A ພຽງແຕ່ແຍກ RNA ເສັ້ນດ່ຽວ.
RNase A ຖືກນໍາໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດເພື່ອເອົາ RNA ໃນລະຫວ່າງການກະກຽມຂອງ plasmid DNA ຫຼື DNA genomic.ບໍ່ວ່າຈະເປັນ DNase ມີການເຄື່ອນໄຫວໃນລະຫວ່າງຂະບວນການກະກຽມສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ປະຕິກິລິຢາໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍ.ວິທີການແບບດັ້ງເດີມຂອງການຕົ້ມໃນອາບນ້ໍາສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອ inactivate DNase ກິດຈະກໍາ.ຜະລິດຕະພັນນີ້ບໍ່ມີ DNase ແລະ protease, ແລະບໍ່ຮຽກຮ້ອງໃຫ້ມີການປິ່ນປົວຄວາມຮ້ອນກ່ອນການນໍາໃຊ້.ນອກຈາກນັ້ນ, ຜະລິດຕະພັນນີ້ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໃນການທົດລອງຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນເຊັ່ນ: ການວິເຄາະການປົກປ້ອງ RNase ແລະການວິເຄາະລໍາດັບ RNA.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ຜະລິດຕະພັນຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ℃ ~ - 15 ℃ 2 ປີ.
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ
| ຮູບລັກສະນະ | ຜົງ |
| ປະລິມານ | 100mg / 1g |
| ປະເພດຜະລິດຕະພັນ | RNase A |
ຄໍາແນະນໍາ
ນີ້ແມ່ນ ໜຶ່ງ ໃນວິທີການທົ່ວໄປໃນການກະກຽມການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNase A.ມັນຍັງສາມາດກະກຽມໂດຍວິທີການອື່ນໆຕາມວິທີການພື້ນເມືອງໃນຫ້ອງທົດລອງຫຼືວັນນະຄະດີອ້າງອີງ (ເຊັ່ນ:ການລະລາຍໂດຍກົງໃນ 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 ຫຼືການແກ້ໄຂ Tris-NaCl)
1. ໃຊ້ 10 mM sodium acetate (pH 5.2) ເພື່ອກະກຽມການແກ້ໄຂການເກັບຮັກສາ RNase A 10 mg/mL.
2. ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຢູ່ທີ່ 100 ℃ສໍາລັບ 15 min.
3. ເຢັນກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ, ເພີ່ມປະລິມານ 1/10 ຂອງ 1 M Tris-HCl (pH 7.4), ປັບ pH ຂອງຕົນເປັນ 7.4 (ສໍາລັບ.ຕົວຢ່າງ, ເພີ່ມ 500 mL ຂອງ 10 mg/mL RNase storage solution 1 M Tris-HCl, pH7.4).
4. ການຫຸ້ມຫໍ່ຍ່ອຍຢູ່ທີ່ -20 ℃ສໍາລັບການເກັບຮັກສາ frozen, ເຊິ່ງສາມາດມີຄວາມຫມັ້ນຄົງໄດ້ເຖິງ 2 ປີ.
[ໝາຍເຫດ]:
ໃນເວລາທີ່ການຕົ້ມນ້ໍາການແກ້ໄຂ RNaseA ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນກາງ, RNase precipitation ຈະປະກອບເປັນ;ຕົ້ມມັນຢູ່ໃນ pH ຕ່ໍາ, ແລະຖ້າຫາກວ່າມີ precipitation, ມັນສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້, ເຊິ່ງອາດຈະເກີດຈາກການມີທາດໂປຼຕີນຈາກ impurities.ຖ້າພົບຂີ້ຕົມຫຼັງຈາກຕົ້ມແລ້ວ, ສິ່ງສົກກະປົກສາມາດເອົາອອກໄດ້ໂດຍການ centrifugation ຄວາມໄວສູງ (13000rpm), ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນບັນຈຸຍ່ອຍສໍາລັບການເກັບຮັກສາ freezing.
ບັນທຶກ
ກະລຸນາໃສ່ PPE ທີ່ຈໍາເປັນ, ເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະຖົງມື, ເພື່ອຮັບປະກັນສຸຂະພາບ ແລະຄວາມປອດໄພຂອງທ່ານ.
