ຫນຶ່ງຂັ້ນຕອນ RT-qPCR SYBR Green Premix
ໝາຍເລກແມວ: HCB5140A
ຂັ້ນຕອນຫນຶ່ງ RT-qPCR Syber Green Premix ແມ່ນສໍາລັບປະລິມານ fluorescence ໂດຍອີງໃສ່ SYBR Green I dye.ການນໍາໃຊ້ primers ສະເພາະຂອງ gene, reverse transcription ແລະ qPCR ຕິກິຣິຍາແມ່ນສໍາເລັດໃນທໍ່ດຽວ, ກໍາຈັດຄວາມຕ້ອງການສໍາລັບການເປີດ cap-op ແລະ pipetting ຊ້ໍາ, ປັບປຸງປະສິດທິພາບການວິເຄາະຢ່າງຫຼວງຫຼາຍແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການປົນເປື້ອນ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ RNA, ຊຸດໃຊ້ Reverse Transcriptase ທົນທານຕໍ່ຄວາມຮ້ອນສໍາລັບການສັງເຄາະ cDNA ທີ່ມີປະສິດທິພາບແລະ HotStart Taq DNA Polymerase ສໍາລັບການຂະຫຍາຍປະລິມານ.ພາຍໃຕ້ລະບົບ buffer ທີ່ດີທີ່ສຸດ, ຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງຊຸດສາມາດສູງເຖິງ 0.1 pg ສໍາລັບເປົ້າຫມາຍທີ່ສະແດງອອກສູງແລະສູງເຖິງ 1 pg ສໍາລັບເປົ້າຫມາຍທີ່ສະແດງອອກປານກາງ.ຊຸດດັ່ງກ່າວແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການຂະຫຍາຍແລະປະລິມານຂອງຕົວຢ່າງ DNA.ມັນຊ່ວຍໃຫ້ການກວດຫາທີ່ລະອຽດອ່ອນແລະປະລິມານຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກຈາກຕົວຢ່າງຂອງພືດແລະສັດ, ຈຸລັງແລະຈຸລິນຊີທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ອົງປະກອບ
| No | ຊື່ | ປະລິມານ | ປະລິມານ |
| 1 | Advanced Buffer | 250 ມລ | 2×1.25ມລ |
| 2 | ການປະສົມຂອງເອນໄຊຂັ້ນສູງ | 20 ມລ | 200 ມລ |
| 3 | RNase ຟຣີ H2O | 250 ມລ | 2×1.25ມລ |
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ຜະລິດຕະພັນນີ້ຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -25 ~ -15 ℃ຫ່າງຈາກແສງສະຫວ່າງສໍາລັບ 1 ປີ.
ຄໍາແນະນໍາ
1.Reaction ການຕັ້ງຄ່າລະບົບd
| ອົງປະກອບ | ປະລິມານ (μL) | ປະລິມານ (μL) | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| Advanced Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| ການປະສົມຂອງເອນໄຊຂັ້ນສູງ | 1 | 2 | - |
| ຟອກ primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| ຢາງຮອງພື້ນ (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase ຟຣີ H2ອc | ເຖິງ 25 | ເຖິງ 50 | - |
ໝາຍເຫດ:
1) ກ.ທຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ primer ສຸດທ້າຍແມ່ນ 0.2 μmol / L, ເຊິ່ງສາມາດປັບໄດ້ລະຫວ່າງ 0.1 ແລະ 1μmol / L ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ.
2) ຂ.ການ reagent ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສຸດ, ມີ Total RNA ຢູ່ໃນລະດັບຂອງ 1pg-1μg, ແລະການທົດສອບຕົວຢ່າງຂອງມະນຸດໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປ້ອນຂໍ້ມູນທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ 1 pg-100 ng, ການຄວບຄຸມສໍາລັບມູນຄ່າ Ct ໂດຍລວມໃນລະດັບ 15-30 ຕາມຄວາມເຫມາະສົມ.
3) ຄ.ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ 20μL ຫຼື 50μL ເພື່ອຮັບປະກັນຄວາມຖືກຕ້ອງແລະການແຜ່ພັນຂອງການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາເປົ້າຫມາຍ.
4) ງ.ກະລຸນາກຽມຕົວຢູ່ໃນ bench ທີ່ສະອາດສຸດແລະການນໍາໃຊ້ຄໍາແນະນໍາທີ່ບໍ່ມີ nuclease residue ແລະທໍ່ຕິກິຣິຍາ;ຄໍາແນະນໍາທີ່ມີໄສ້ຕອງການກັ່ນຕອງແມ່ນແນະນໍາ.ຫຼີກເວັ້ນການປົນເປື້ອນຂ້າມແລະການປົນເປື້ອນ aerosol.
2.ໂຄງການປະຕິກິລິຍາ
| ຂັ້ນຕອນຮອບວຽນ | ອຸນຫະພູມ. | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| ການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບກັນ | 50 ℃a | 6 ນາທີ | 1 |
| ການສະແດງອອກເບື້ອງຕົ້ນ | 95℃ | 5 ນາທີ | 1 |
| ປະຕິກິລິຍາການຂະຫຍາຍ | 95℃ | 15 ວິ | 40 |
| 60 ℃b | 30 ວິ | ||
| ຂັ້ນຕອນຂອງການລະລາຍເສັ້ນໂຄ້ງ | ຄ່າເລີ່ມຕົ້ນຂອງເຄື່ອງມື | 1 | |
ໝາຍເຫດ:
1) ກ.ອຸນຫະພູມການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບຍ້ອນກັບສາມາດເລືອກໄດ້ລະຫວ່າງ 50-55 ອົງສາ C ຕາມຄວາມຕ້ອງການໃນການທົດລອງ.ສໍາລັບຕົວຢ່າງ DNA, ຂະບວນການ transcription reverse ສາມາດຖືກຍົກເວັ້ນ.
2) ຂ.ໃນກໍລະນີພິເສດອຸນຫະພູມ annealing/extension ສາມາດໄດ້ຮັບການປັບຕາມຄ່າ primer Tm, 60°C ແມ່ນແນະນໍາໃຫ້.
ບັນທຶກ
1. ຜະລິດຕະພັນນີ້ແມ່ນສໍາລັບການນໍາໃຊ້ການຄົ້ນຄວ້າເທົ່ານັ້ນ.
2. ກະລຸນາປະຕິບັດດ້ວຍເສື້ອຄຸມຫ້ອງທົດລອງ ແລະຖົງມືທີ່ໃຊ້ແລ້ວຖິ້ມໄດ້, ເພື່ອຄວາມປອດໄພຂອງທ່ານ.
