Proteinase K NGS (ຜົງ)
ໝາຍເລກແມວ: HC4507A
NGS Protease K ເປັນ protease serine ທີ່ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງທີ່ມີກິດຈະກໍາ enzyme ສູງແລະຄວາມຈໍາເພາະຂອງ substrate ກວ້າງ. enzyme ມັກ decomposes ພັນທະບັດ ester ແລະພັນທະບັດ peptide ຕິດກັບ C-terminal ຂອງອາຊິດ amino hydrophobic, ອາຊິດ amino ຊູນຟູຣິກແລະອາຊິດ amino ທີ່ມີກິ່ນຫອມ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນມັກຈະຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອ degrade ທາດໂປຼຕີນເຂົ້າໄປໃນ peptides ສັ້ນ.NGS Protease K ແມ່ນ protease serine ປົກກະຕິທີ່ມີ Asp39- ລາວ69-ເຊີ224triad catalytic ເຊິ່ງເປັນເອກະລັກຂອງ serine proteases, ແລະສູນກາງ catalytic ແມ່ນອ້ອມຮອບດ້ວຍ tow Ca.2+ສະຖານທີ່ຜູກມັດສໍາລັບການສະຖຽນລະພາບ, ການຮັກສາກິດຈະກໍາ enzyme ສູງພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ກວ້າງຂວາງ.
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະ
| ຮູບລັກສະນະ | ຝຸ່ນ amorphous ສີຂາວຫາສີຂາວ, lyophilized |
| ກິດຈະກໍາສະເພາະ | ≥40U/mg ແຂງ |
| ດີນາສ | ບໍ່ກວດພົບ |
| RNase | ບໍ່ກວດພົບ |
| Bioburden | ≤50CFU/g ແຂງ |
| ອາຊິດນິວຄລີອິກຕົກຄ້າງ | <5pg/mg ແຂງ |
ຄຸນສົມບັດ
| ທີ່ມາ | ອະລະບໍ້າ Tritiracium |
| ໝາຍເລກ EC | 3.4.21.64(ຜະສົມຜະສານຈາກອະລະບໍ້າ Tritiracium) |
| ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ | 29kDa (SDS-PAGE) |
| ຈຸດ isoelectric | 7.81 Fig.1 |
| pH ທີ່ດີທີ່ສຸດ | 7.0-12.0 (ທັງໝົດປະຕິບັດກິດຈະກໍາສູງ) Fig.2 |
| ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ | 65 ℃ Fig.3 |
| ສະຖຽນລະພາບ pH | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Fig.4 |
| ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງຄວາມຮ້ອນ | ຕ່ໍາກວ່າ 50℃ (pH 8.0, 30min) Fig.5 |
| ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງການເກັບຮັກສາ | ເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ທີ່ 25℃ ສໍາລັບ 12 ເດືອນ Fig.6 |
| ຕົວກະຕຸ້ນ | SDS, urea |
| ຢາຍັບຍັ້ງ | Diisopropyl fluorophosphate;benzylsulfonyl fluoride |
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ເກັບຮັກສາຝຸ່ນ lyophilized ຢູ່ທີ່ -25 ~ -15 ℃ສໍາລັບເວລາດົນນານຫ່າງຈາກແສງສະຫວ່າງ;ຫຼັງຈາກການລະລາຍ, aliquot ເຂົ້າໄປໃນປະລິມານທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການເກັບຮັກສາໄລຍະສັ້ນຢູ່ທີ່ 2-8 ℃ຫ່າງຈາກແສງສະຫວ່າງຫຼືການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວຢູ່ທີ່ -25 ~ -15 ℃ຫ່າງຈາກແສງສະຫວ່າງ.
ການປ້ອງກັນລ່ວງໜ້າ
ໃສ່ຖົງມືແລະແວ່ນຕາປ້ອງກັນໃນເວລາໃຊ້ຫຼືຊັ່ງນໍ້າຫນັກ, ແລະຮັກສາລະບາຍອາກາດໄດ້ດີຫຼັງຈາກການນໍາໃຊ້.ຜະລິດຕະພັນນີ້ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດອາການແພ້ຕໍ່ຜິວຫນັງແລະການລະຄາຍເຄືອງຕາທີ່ຮ້າຍແຮງ.ຖ້າຫາຍໃຈເຂົ້າ, ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດອາການແພ້ ຫຼື ອາການຫືດ ຫຼື ຫາຍໃຈຝືດ.ອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການລະຄາຍເຄືອງທາງຫາຍໃຈ.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນຶ່ງຫນ່ວຍຂອງ NGS Protease K ຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນ enzyme ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອ hydrolyze casein ເຂົ້າໄປໃນ 1 μmol L-tyrosine ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການກໍານົດມາດຕະຖານ.
ການກະກຽມ reagents
| Reagent | ຜູ້ຜະລິດ | ລາຍການ |
| Casein ດ້ານວິຊາການຈາກນົມງົວ | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 10019762 |
| ນາຮ2PO4· 2H2O | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 20040618 |
| ອາຊິດ Trichloroacetic | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 80132618 |
| ໂຊດຽມ acetate | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 10018818 |
| ອາຊິດອາຊິດ | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 10011018 |
| ໂຊດຽມຄາບອນ | Sinopharm ເຄມີReagent Co., Ltd. | 10019260 |
| ໂຟລີນ-ຟີນອລ | Sangon Biotech (ຊຽງໄຮ)ບໍລິສັດ ຈໍາກັດ. | A500467-0100 |
| L-tyrosine | Sigma | 93829 |
Reagent I:
Substrate: 1% Casein ຈາກການແກ້ໄຂ້ໍານົມ bovine: ລະລາຍ 1g casein ້ໍານົມ bovine ໃນ 50ml ຂອງ 0.1M ການແກ້ໄຂ sodium phosphate, pH 8.0, ຄວາມຮ້ອນໃນອາບນ້ໍາທີ່ 65-70 ° C ສໍາລັບ 15 ນາທີ, stir ແລະລະລາຍ, ເຢັນດ້ວຍນ້ໍາ, ປັບໂດຍ. sodium hydroxide ກັບ pH 8.0, ແລະ dilute ໃນ 100ml.
Reagent II:
ການແກ້ໄຂ TCA: 0.1M trichloroacetic acid, 0.2M sodium acetate ແລະ 0.3M acetic acid (ນໍ້າຫນັກ 1.64g trichloroacetic acid + 1.64g sodium acetate + 1.724mL ອາຊິດ acetic ຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ເພີ່ມນ້ໍາ deionized 50mL, ປັບດ້ວຍ HCl 4.0 ແລະ p.H. 100ml).
Reagent III:
ການແກ້ໄຂ sodium carbonate 0.4m (ນໍ້າຫນັກ 4.24g anhydrous sodium carbonate ແລະລະລາຍໃນນ້ໍາ 100mL)
Reagent IV:
Folin phenol reagent: ເຈືອຈາງ 5 ເທື່ອດ້ວຍນ້ໍາ deionized.
Reagent V:
Enzyme diluent: 0.1 M sodium phosphate solution, pH 8.0.
Reagent VI:
ການແກ້ໄຂມາດຕະຖານ L-tyrosine: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-tyrosine ລະລາຍດ້ວຍ 0.2M HCl.
ຂັ້ນຕອນ
1. ເປີດເຄື່ອງວັດແທກແສງ UV-Vis ແລະເລືອກການວັດແທກ photometric.
2. ກໍານົດຄວາມຍາວຂອງຄື້ນເປັນ 660nm.
3. ເປີດອາບນ້ໍາ, ຕັ້ງອຸນຫະພູມໃຫ້ 37 ℃, ຮັບປະກັນອຸນຫະພູມບໍ່ປ່ຽນແປງສໍາລັບ 3-5 ນາທີ.
4. Preheat substrate 0.5mL ໃນທໍ່ centrifuge 2mL ທີ່ອາບນ້ໍາ 37℃ ສໍາລັບ 10 ນາທີ.
5. ສະກັດ 0.5mL diluted enzyme solution ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge preheated ສໍາລັບ 10 ນາທີ.ຕັ້ງ enzyme diluent ເປັນກຸ່ມເປົ່າ.
6. ຕື່ມ 1.0 mL TCA reagent ທັນທີຫຼັງຈາກຕິກິຣິຍາ.ປົນກັນແລະ incubate ໃນອາບນ້ໍາສໍາລັບ 30 ນາທີ.
7. ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ centrifugate.
8. ເພີ່ມອົງປະກອບຕໍ່ໄປນີ້ຕາມລໍາດັບທີ່ລະບຸ.
| Reagent | ປະລິມານ |
| ສຸດຍອດ | 0.5 ມລ |
| 0.4M Sodium carbonate | 2.5 ມລ |
| Folin phenol reagent | 0.5 ມລ |
9. ປະສົມໃຫ້ດີກ່ອນອົບໃນອາບນ້ຳທີ່ອຸນຫະພູມ 37 ອົງສາ ປະໄວ້ 30 ນາທີ.
10. OD660ຖືກກໍານົດເປັນ OD1;ກຸ່ມຄວບຄຸມເປົ່າ: ເຈືອຈາງຂອງເອນໄຊຖືກໃຊ້ເພື່ອທົດແທນການແກ້ໄຂ enzyme ເພື່ອກໍານົດ OD660ເປັນ OD2, ΔOD=OD1-OD2.
11. ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ L-tyrosine: 0.5mL ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງການແກ້ໄຂ L-tyrosine, 2.5mL 0.4M Sodium carbonate, 0.5mL Folin phenol reagent ໃນທໍ່ centrifuge 5mL, incubate ໃນ 37℃ ສໍາລັບ 30mins, ກວດພົບສໍາລັບ OD660ສໍາລັບຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ L-tyrosine ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ Y = kX + b, ບ່ອນທີ່ Y ແມ່ນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ L-tyrosine, X ແມ່ນ OD600.
ການຄິດໄລ່
2: ປະລິມານທັງໝົດຂອງການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ (ມລ)
0.5: ປະລິມານການແກ້ໄຂ enzyme (mL)
0.5: ປະລິມານຂອງແຫຼວປະຕິກິລິຍາທີ່ໃຊ້ໃນການກໍານົດ chromogenic (mL)
10: ເວລາປະຕິກິລິຍາ (ນາທີ)
Df: dilution ຫຼາຍ
C: ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເອນໄຊ (mg/mL)
ຕົວເລກ
Fig.1 DNA residue
| ຕົວຢ່າງ | Ave C4 | ອາຊິດນິວຄລີອິກ ການຟື້ນຕົວ(pg/mg) | ການຟື້ນຕົວ(%) | ນິວຄລີນິກທັງໝົດ ອາຊິດ ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O ບໍ່ມີ RNA | ບໍ່ໄດ້ກໍານົດ | — | — | — |
Fig.2 pH ທີ່ດີທີ່ສຸດ
Fig.3 ອຸນຫະພູມທີ່ດີທີ່ສຸດ
Fig.4 ສະຖຽນລະພາບ pH
Fig.5 ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງຄວາມຮ້ອນ
Fig.6 ສະຖຽນລະພາບການເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ 25 ℃
