Rnase inhibitor (ບໍ່ມີ Glycerol)
Murine RNase inhibitor ແມ່ນສານຍັບຍັ້ງ murine RNase ທີ່ປະສົມປະສານທີ່ສະແດງອອກແລະບໍລິສຸດຈາກ E.coli.ມັນຜູກມັດກັບ RNase A, B ຫຼື C ໃນອັດຕາສ່ວນ 1: 1 ໂດຍຜ່ານການຜູກມັດທີ່ບໍ່ແມ່ນ covalent, ດັ່ງນັ້ນການຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງສາມເອນໄຊແລະປົກປ້ອງ RNA ຈາກການເຊື່ອມໂຊມ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ມັນບໍ່ມີປະສິດຕິຜົນຕໍ່ກັບ RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H ຫຼື RNase ຈາກ Aspergillus.Murine RNase inhibitor ໄດ້ຖືກທົດສອບໂດຍ RT-PCR, RT-qPCR ແລະ IVT mRNA, ແລະເຂົ້າກັນໄດ້ກັບ transcriptases Reverse ການຄ້າຕ່າງໆ, DNA polymerases ແລະ RNA polymerases.
ເມື່ອປຽບທຽບກັບສານຍັບຍັ້ງ RNase ຂອງມະນຸດ, murine RNase inhibitor ບໍ່ມີສອງ cysteine ທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງຕໍ່ການຜຸພັງເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ເກີດການກະຕຸ້ນຂອງ inhibitor.ທີ່ເຮັດໃຫ້ມີຄວາມຫມັ້ນຄົງຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຕ່ໍາຂອງ DTT (ຫນ້ອຍກວ່າ 1 mM).ຄຸນນະສົມບັດນີ້ເຮັດໃຫ້ມັນເຫມາະສົມສໍາລັບການນໍາໃຊ້ໃນຕິກິລິຍາທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງ DTT ກົງກັນຂ້າມກັບປະຕິກິລິຍາ (ເຊັ່ນ: RT-PCR ໃນເວລາຈິງ).
Aຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ
ຜະລິດຕະພັນນີ້ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງໃນການທົດລອງໃດໆທີ່ການແຊກແຊງ RNase ເປັນໄປໄດ້ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການທໍາລາຍ RNA, ເຊັ່ນ:
1.First-strand ການສັງເຄາະ cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ແລະອື່ນໆ;
2. ປົກປ້ອງ RNA ຈາກການເສື່ອມໂຊມໃນ in-vitro transcription/translation (ຕົວຢ່າງ viral replication in vitro);
3.Inhibition ຂອງກິດຈະກໍາ RNase ໃນລະຫວ່າງການແຍກ RNA ແລະການຊໍາລະລ້າງ.
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ -25～-15℃;
ຮອບວຽນ freeze-thaw ≤ 5 ເທື່ອ;
ໃຊ້ໄດ້ 1 ປີ.
ນິຍາມຫົວໜ່ວຍ
ຫນ່ວຍຫນຶ່ງຖືກກໍານົດເປັນຈໍານວນ RNase Inhibitor ທີ່ຕ້ອງການເພື່ອຍັບຍັ້ງກິດຈະກໍາຂອງ 5 ng ຂອງ RNase A ໂດຍ 50%.
ນ້ຳໜັກໂມເລກຸນ
RNase Inhibitor (ບໍ່ມີ Glycerol) ແມ່ນທາດໂປຼຕີນ 50 kDa.
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
Exonuclease ການເຄື່ອນໄຫວ:
incubation ຂອງ 40 U ຂອງ enzyme ກັບ 1 μg λ-Hind III ຍ່ອຍ DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
ກິດຈະກໍາ Endonuclease:
ການຝັງຕົວຂອງ 40 U ຂອງ enzyme ກັບ 1 μg λ DNA ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງຢູ່ທີ່ 37 ° C ສົ່ງຜົນໃຫ້ບໍ່ສາມາດກວດພົບການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA ຕາມການກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
Nicking ການເຄື່ອນໄຫວ:
Incubation ຂອງ 40 U ຂອງ enzyme ກັບ 1 μg pBR322 ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ເຮັດໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຂອງ DNA ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
RNase ກິດຈະກໍາ:
Incubation ຂອງ 40 U ຂອງ enzyme ກັບ 1.6 μg MS2 RNA ສໍາລັບ 4 ຊົ່ວໂມງທີ່ 37 ℃ເຮັດໃຫ້ບໍ່ມີການເຊື່ອມໂຊມຂອງ RNA ຕາມການກໍານົດໂດຍ gel electrophoresis.
E.coli DNA:
40 U ຂອງ Enzyme ຖືກກວດພົບໂດຍ TaqMan qPCR.E.coli DNA ແມ່ນ ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1.ຢ່າສັ່ນ ຫຼື stir ຢ່າງຮຸນແຮງເພື່ອປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ enzyme inactivation.
2.RNase inhibitor ມີການເຄື່ອນໄຫວຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕັ້ງແຕ່ 25℃ to 55℃ ແລະ inactivated ≥65℃.
3. ກິດຈະກໍາຂອງ RNase H, RNase 1, ແລະ RNase T1 ບໍ່ໄດ້ຖືກຍັບຍັ້ງ.
4.The pH range for inhibiting RNase activity is wide (active at pH 5-9), ສະແດງກິດຈະກໍາສູງສຸດທີ່ pH 7-8.
