DNA Extraction Mini Kit HC1007B ຮູບພາບທີ່ໂດດເດັ່ນ

ຊຸດ DNA Extraction Mini

ໝາຍເລກແມວ: HC1007B

ການຫຸ້ມຫໍ່: 100RXN / 200RXN

ຊຸດນີ້ໃຊ້ລະບົບ buffer ທີ່ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີທີ່ສຸດ ແລະເທກໂນໂລຍີການເຮັດຄວາມສະອາດຖັນ silica gel, ເຊິ່ງສາມາດຟື້ນຕົວຊິ້ນ DNA 70 bp -20 kb ຈາກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ TAE ຫຼື TBE agarose gel.

ສົ່ງສອບຖາມ

ລາຍລະອຽດຜະລິດຕະພັນ

ຊຸດນີ້ໃຊ້ລະບົບ buffer ທີ່ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີທີ່ສຸດ ແລະເທກໂນໂລຍີການເຮັດຄວາມສະອາດຖັນ silica gel, ເຊິ່ງສາມາດຟື້ນຕົວຊິ້ນ DNA 70 bp – 20 kb ຈາກຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆຂອງ TAE ຫຼື TBE agarose gel.ຖັນການດູດຊຶມ DNA ພິເສດສາມາດດູດຊຶມ DNA ພາຍໃຕ້ສະພາບທີ່ມີເກືອສູງ.ນອກຈາກນັ້ນ, ຊຸດດັ່ງກ່າວສາມາດຊໍາລະຊິ້ນ DNA ໂດຍກົງຈາກຜະລິດຕະພັນ PCR, ລະບົບຕິກິຣິຍາ enzymatic ຫຼືຜະລິດຕະພັນ DNA ດິບທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍວິທີການອື່ນໆ, ແລະເອົາສິ່ງທີ່ບໍ່ສະອາດເຊັ່ນ: ທາດໂປຼຕີນ, ທາດປະສົມອິນຊີອື່ນໆ, ທາດເກືອອະນົງຄະທາດແລະ primers oligonucleotide.ມັນສາມາດຮັບປະກັນວ່າການຊໍາລະສາມາດສໍາເລັດພາຍໃນ 10-15min.DNA ບໍລິສຸດສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການ ligation, ການຫັນເປັນ, ການຍ່ອຍອາຫານຂອງ enzyme, in vitro transcription, PCR, ລໍາດັບ, microinjection, ແລະອື່ນໆ.

ທີ່ຜ່ານມາ: EndoFree Plasmid Maxi Kit HC1006B

ຕໍ່ໄປ: ຊຸດສະກັດ DNA/RNA ໄວຣັສ HC1008B

ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ

ເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ -15 ~ -25 ℃ແລະການຂົນສົ່ງຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

ອົງປະກອບ

ອົງປະກອບ	(100 rxns)
Buffer GDP	80 ມລ
Buffer GW	2×20 ມລ
Elution Buffer	20 ມລ
FastPure DNA Mini Columns-G	100

Buffer GDP:ບັບເຟີການຜູກມັດ DNA.

Buffer GW:ລ້າງ buffer;ຕື່ມເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງໂດຍປະລິມານທີ່ລະບຸໄວ້ໃນຂວດກ່ອນທີ່ຈະໃຊ້.

Elution Buffer:Elution.

FastPure DNA Mini Columns-G:ຖັນການດູດຊຶມ DNA.

ທໍ່ເກັບ 2 ມລ:ທໍ່ເກັບລວບລວມສໍາລັບການກັ່ນຕອງ.

ວັດສະດຸກະກຽມ

ທໍ່ຂ້າເຊື້ອ 1.5 ມລ, ເອທານອນຢ່າງແທ້ຈິງ ແລະ ໄອໂຊໂປຣຟານອລ (ເມື່ອຊິ້ນ DNA ≤100 bp, ເພີ່ມ 1 ປະລິມານ

isopropanol ກັບ 1 ປະລິມານ gel), ອາບນ້ໍາ.

ຂະບວນການທົດລອງ

ເພີ່ມ 80 ມລຂອງເອທານອນເພື່ອເຈືອຈາງ Buffer GW ຕາມທີ່ລະບຸໄວ້ໃນໂຄດຄໍາສັ່ງກ່ອນການນໍາໃຊ້, ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

ກົນໄກ

1. ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ PCR

ໂຄງການສະກັດເອົາເຈນ: ເພີ່ມປະລິມານທີ່ເທົ່າທຽມກັນ Buffer GDP PCR ໂຄງການຟື້ນຟູການແກ້ໄຂຕິກິຣິຍາ:ເພີ່ມ 5 ເທົ່າຂອງປະລິມານ Buffer

2. GDP ຄິດໄລ່ປະລິມານຂອງເຈນ (100 μl ເທົ່າກັບ 100 mg)

ເຈວລະລາຍ

3. Preheat ຢູ່ 50 ~ 55℃

4. ມັດລ້າງ

ເພີ່ມ 300 μL ຂອງ Buffer GDP*

ເພີ່ມ Buffer GW 700 μL

5. Elute

ຕື່ມ 20 – 30μL ຂອງ Elution Buffer ຫຼືນ້ໍາ deionized

ຫມາຍເຫດ* ການຟື້ນຕົວຂອງນ້ໍາປະຕິກິລິຍາ PCR ໂດຍບໍ່ມີຂັ້ນຕອນນີ້

ໂຄງການສະກັດ gel

1. ຫຼັງຈາກ electrophoresis DNA ສໍາລັບການແຍກຊິ້ນສ່ວນ DNA, excise ເສັ້ນດ່າງດຽວຂອງຊິ້ນ DNA ຈາກ gel agarose ພາຍໃຕ້ແສງ UV.ມັນແນະນໍາໃຫ້ໃຊ້ກະດາດດູດຊຶມເພື່ອດູດຊຶມຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຂອງເຈນແລະຫຼຸດຜ່ອນຂະຫນາດຂອງເຈວໃຫ້ຫນ້ອຍທີ່ສຸດໂດຍການເອົາ agarose ພິເສດອອກຕາມທີ່ທ່ານສາມາດເຮັດໄດ້.ຊັ່ງນໍ້າຫນັກຂອງເຈວ (ໂດຍບໍ່ມີທໍ່ microcentrifuge) ເພື່ອຄິດໄລ່ປະລິມານຂອງມັນ: ປະລິມານຂອງ gelslice 100 mg ແມ່ນປະມານ 100 μL, ສົມມຸດວ່າຄວາມຫນາແຫນ້ນແມ່ນ 1g / ml.

2. ເພີ່ມ Buffer GDP ປະລິມານເທົ່າທຽມກັນ, incubate ຢູ່ທີ່ 50 ~ 55 ℃ສໍາລັບ 7-10 min (ອີງຕາມຂະຫນາດ gel, ປັບເວລາ incubation ຈົນກ່ວາ gel ໄດ້ລະລາຍຫມົດ).ປີ້ນທໍ່ 2 ເທື່ອໃນລະຫວ່າງການອົບ.

Δການເພີ່ມປະລິມານ 1-3 ຂອງ Buffer GDP ຈະບໍ່ມີອິດທິພົນຕໍ່ການຟື້ນຕົວຂອງ DNA.ຖ້າຊິ້ນ DNA ທີ່ຈະຟື້ນຕົວ <100 bp, 3 ປະລິມານຂອງ Buffer GDP ຕ້ອງໄດ້ຮັບການເພີ່ມ;ເມື່ອຕ່ອນ gel ໄດ້ລະລາຍຫມົດ, ເພີ່ມ 1 ປະລິມານຂອງ isopropanol ແລະປະສົມຢ່າງລະອຽດ, ຫຼັງຈາກນັ້ນສືບຕໍ່ໄປຂັ້ນຕອນຕໍ່ໄປ.

3. Centrifuge ໂດຍຫຍໍ້ເພື່ອນໍາເອົາຕົວຢ່າງມາໃສ່ລຸ່ມຂອງທໍ່, ໃສ່ FastPure DNA Mini Columns-G ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ເກັບ 2 ml, ລະມັດລະວັງໂອນການແກ້ໄຂສູງສຸດ 700 μLຫນຶ່ງຄັ້ງ.

ໃຊ້ເວລາກັບຖັນການກັ່ນຕອງ, centrifuge ຢູ່ 12,000 rpm (13,800 X g) ສໍາລັບ 30-60 ວິນາທີ.

4. ຖິ້ມການກັ່ນຕອງແລະເພີ່ມ Buffer GDP 300 μLໃສ່ຖັນ, incubate ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 1 min, centrifuge 12,000 rpm (13,800 X g) ສໍາລັບ 30-60 sec.

5. ຖິ້ມການກັ່ນຕອງແລະເພີ່ມ Buffer GW 700 μL (ກວດເບິ່ງວ່າມີ ethanol ຢ່າງແທ້ຈິງໄດ້ຖືກເພີ່ມລ່ວງຫນ້າ!) ເຂົ້າໄປໃນຖັນ, centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,800 X g) ສໍາລັບ 30-60 sec.

Δ ກະລຸນາເພີ່ມ Buffer GW ອ້ອມຝາຖັນ adsorption, ຫຼືເພີ່ມ Buffer GW ຝາຫລັງແລະປະສົມມັນ upside ລົງສໍາລັບ 2 – 3 ເທື່ອເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ນ້ໍາເກືອທີ່ຕິດກັບຝາທໍ່.

6. ເຮັດຊ້ຳຂັ້ນຕອນທີ 5.

Δ Flushing ກັບ Buffer GW ສອງຄັ້ງສາມາດຮັບປະກັນວ່າເກືອໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຢ່າງສົມບູນແລະລົບລ້າງຜົນກະທົບໃນການທົດລອງຕໍ່ໄປ.

7. ຖິ້ມການກັ່ນຕອງ ແລະ centrifuge ຖັນເປົ່າຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,800 X g) ສໍາລັບ 2 ນາທີ.

8. ໃສ່ຄໍລໍາເຂົ້າໄປໃນທໍ່ microcentrifuge 1.5 ມລທີ່ສະອາດ, ເພີ່ມ 20 - 30 μLຂອງ Elution Buffer ໃສ່ໃຈກາງຂອງເຍື່ອຄໍລໍາ, incubate ສໍາລັບ 2 min, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,800 X g) ສໍາລັບ 1 min.ຖິ້ມຖັນ, ເກັບຮັກສາ DNA ທີ່ໄດ້ຮັບຢູ່ທີ່ -20 .

Δ ການຖ່າຍທອດ supernatant ຂອງຂັ້ນຕອນທີ 8 ໄປຫາຖັນເພື່ອ elute ອີກເທື່ອຫນຶ່ງແລະ preheating Elution Buffer ເປັນ 55 (ເມື່ອ DNA fragment >3 kb) ອາດຈະຊ່ວຍເພີ່ມປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວ.

ໂຄງການຟື້ນຟູຜະລິດຕະພັນ PCR

ອະນຸສັນຍານີ້ແມ່ນໃຊ້ໄດ້ເພື່ອຊໍາລະຊິ້ນ DNA ຈາກຜະລິດຕະພັນ PCR, ລະບົບປະຕິກິລິຍາ enzymatic ແລະຜະລິດຕະພັນດິບ DNA ອື່ນໆ (ລວມທັງ DNA ພັນທຸກໍາ).ການແກ້ໄຂນີ້ສາມາດກໍາຈັດ nucleotides ຕ່າງໆ, primers, primer dimers, ໂມເລກຸນເກືອ, enzymes ແລະ impurities ອື່ນໆຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.

1. ຜະລິດຕະພັນ PCR centrifuge ໂດຍຫຍໍ້, ການແກ້ໄຂປະຕິກິລິຍາ enzymatic, ແລະຜະລິດຕະພັນດິບ DNA ອື່ນໆ.ຄາດຄະເນປະລິມານຂອງເຂົາເຈົ້າດ້ວຍ pipette ແລະໂອນເຂົ້າໄປໃນທໍ່ 1.5 ມລຫຼື 2 ມລ.ເພີ່ມ ddH2O ຈົນກ່ວາປະລິມານສູງເຖິງ 100 μL;ໃນຂະນະທີ່ສໍາລັບ DNA genomic ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສູງ, ການເຈືອຈາງເປັນ 300 μLດ້ວຍ ddH2O ຈະຊ່ວຍປັບປຸງປະສິດທິພາບການຟື້ນຟູ.

2. ເພີ່ມ 5 ປະລິມານຂອງ Buffer GDP, ປະສົມຢ່າງລະອຽດໂດຍການ inverting ຫຼື vortexing.ຖ້າ DNA fragment ມີຄວາມສົນໃຈ >100 bp, 1.5 ປະລິມານເພີ່ມເຕີມ (ຕົວຢ່າງ + Buffer GDP) ຂອງ ethanol ຕ້ອງໄດ້ຮັບການເພີ່ມ.

3. ສຽບຖັນກັບຄືນເຂົ້າໄປໃນທໍ່ເກັບລວບລວມ, ໂອນ mixtrue ໄປຫາຖັນ, centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,800 ×g) ສໍາລັບ 30 – 60 ວິນາທີ.ຖ້າປະລິມານຂອງສານປະສົມແມ່ນ > 700 µL, ເອົາຖັນ adsorption ກັບຄືນເຂົ້າໄປໃນທໍ່ເກັບລວບລວມ, ໂອນການແກ້ໄຂທີ່ຍັງເຫຼືອໄປຫາຖັນ adsorption, ແລະ centrifuge ຢູ່ທີ່ 12,000 rpm (13,800 × g) ສໍາລັບ 30 - 60 ວິນາທີ.

4. ການປະຕິບັດຕໍ່ໄປຫມາຍເຖິງຂັ້ນຕອນ 5 – 8 ຂອງ 08- 1/ໂຄງການສະກັດເອົາເຈນ.

ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກ

ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຕ່າງໆຂອງ TAE ຫຼື TBE agarose gel;ຜະລິດຕະພັນ PCR, ລະບົບປະຕິກິລິຍາ enzymatic ຫຼືຜະລິດຕະພັນ DNA ດິບອື່ນໆທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍວິທີການຕ່າງໆ.ຊິ້ນສ່ວນທີ່ຟື້ນຕົວມາຈາກ70 bp -20 kb.

ບັນທຶກ

ສໍາລັບການນໍາໃຊ້ການຄົ້ນຄວ້າເທົ່ານັ້ນ.ບໍ່ແມ່ນເພື່ອໃຊ້ໃນຂັ້ນຕອນການວິນິດໄສ.

1. ຕື່ມ 80 ມລຂອງເອທານອນເພື່ອເຈືອຈາງ Buffer GW ຕາມທີ່ລະບຸໄວ້ໃນໂຄດຄໍາສັ່ງກ່ອນການນໍາໃຊ້, ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.

2. ຖ້າຫາກວ່າ Buffer GDP ງ່າຍທີ່ຈະ precipitate ໃນລະຫວ່າງການເກັບຮັກສາອຸນຫະພູມຕ່ໍາ, ມັນສາມາດຖືກວາງໄວ້ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບໄລຍະເວລາກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້.ຖ້າຈໍາເປັນ, ມັນສາມາດ preheated ໃນອາບນ້ໍາ 37 ℃ຈົນກ່ວາ precipitate ຈະລະລາຍຫມົດ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ຫຼັງຈາກປະສົມ.

3. ຕັ້ງອຸນຫະພູມອາບນ້ໍາເປັນ 50 ~ 55 ℃ລ່ວງຫນ້າ.

4. ໃນ 08-1/ໂຄງການສະກັດເອົາເຈນຂັ້ນຕອນທີ 1, ການຫຼຸດຂະໜາດຂອງເຈວໃຫ້ໜ້ອຍທີ່ສຸດຈະຫຼຸດເວລາການລະລາຍລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ ແລະ ເພີ່ມປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວ (DNA Linearized ແມ່ນງ່າຍທີ່ຈະ hydrolyze ເມື່ອຖືກອຸນຫະພູມສູງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ).ຢ່າປ່ອຍ DNA gel ໃຫ້ກັບ UV ເປັນເວລາດົນນານ, ເພາະວ່າແສງ ultraviolet ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຂອງ DNA.

5. ລະລາຍເຈວໃນ 08- 1/ໂຄງການສະກັດເອົາເຈນຂັ້ນຕອນທີ 2 ຢ່າງສົມບູນ, ຖ້າບໍ່ດັ່ງນັ້ນປະສິດທິພາບການຟື້ນຕົວຂອງ DNA ຈະໄດ້ຮັບຜົນກະທົບຢ່າງຮ້າຍແຮງ.

6. Preheat Elution Buffer ຫຼື ddH2O ກັບ 55℃ , ເຊິ່ງເປັນປະໂຫຍດໃນການປັບປຸງປະສິດທິພາບ elution DNA.ມັນໄດ້ຖືກແນະນໍາໃຫ້ເກັບ DNA ໃນ eluent ຂອງ 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 – 8.5.