5× Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
ໝາຍເລກແມວ: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) ເປັນເຄື່ອງປະສົມທີ່ອີງໃສ່ການສຳຫຼວດທໍ່ດຽວທີ່ມີຄວາມໝັ້ນຄົງສູງ ເໝາະສຳລັບການຖອດຂໍ້ຄວາມແບບປີ້ນກັບຂັ້ນຕອນໜຶ່ງ ແລະ PCR ປະລິມານ (qRT-PCR).ມັນສະຫນັບສະຫນູນການປະສົມກ່ອນຂອງ primers ແລະ probes ແລະຄວາມຫມັ້ນຄົງຫຼັງຈາກການເກັບຮັກສາເວລາດົນນານຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຕ່ໍາ.ຕົວຢ່າງທີ່ຈະໄດ້ຮັບການທົດສອບສາມາດໄດ້ຮັບການເພີ່ມໂດຍກົງໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້, ໂດຍບໍ່ມີການເປີດທໍ່ເພີ່ມເຕີມ / ການດໍາເນີນງານທໍ່.ຜະລິດຕະພັນນີ້ສະຫນອງອົງປະກອບ, ເຊັ່ນ: hot-start DNA polymerase, M-MLV, heat-labile uracil DNA glycosylase (TS-UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, dNTPs (ກັບ dUTP ແທນ dTTP), ແລະ stabilizers.ດ້ວຍການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາຢ່າງໄວວາ reverse transcriptase ແລະ DNA polymerase, ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະສໍາເລັດການຂະຫຍາຍ PCR ພາຍໃນ 20-40 ນາທີ.ທາດປະສົມນີ້ໃຊ້ buffer ພິເສດສໍາລັບ qPCR ທີ່ມີ enzymes ປະສົມຂອງ enzyme ຕ້ານການຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍແລະ enzyme UNG.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນສາມາດໄດ້ຮັບການຂະຫຍາຍພັນທຸກໍາເປົ້າຫມາຍທີ່ດີແລະປ້ອງກັນການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງທີ່ເກີດຈາກ PCR ແລະມົນລະພິດ aerosol.ທາດປະສົມນີ້ແມ່ນເຂົ້າກັນໄດ້ກັບອຸປະກອນ PCR ປະລິມານ fluorescence ສ່ວນໃຫຍ່ຈາກຜູ້ຜະລິດເຊັ່ນ Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ແລະ Roche.
ອົງປະກອບ
1.25× Neoscript Fast RTase/UNG Mix
2.5× Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
ເງື່ອນໄຂການເກັບຮັກສາ
ອົງປະກອບທັງຫມົດຄວນໄດ້ຮັບການເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -20 ℃ສໍາລັບການເກັບຮັກສາໃນໄລຍະຍາວແລະ 4 ℃ສໍາລັບເຖິງ 3 ເດືອນ.ກະລຸນາປະສົມຢ່າງລະອຽດຫຼັງຈາກ thawing ແລະ centrifuge ກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້.ຫຼີກເວັ້ນການແຊ່ແຂງເລື້ອຍໆ.
ການກະກຽມລະບົບປະຕິກິລິຍາ qRT-PCR
| ອົງປະກອບ | 25μLລະບົບ | 50μLລະບົບ | ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຸດທ້າຍ |
| 5× Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25× Neoscript Fast RTase/UNG Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25× Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| ແມ່ແບບ RNAb | – | – | – |
| ddH2O | ສູງເຖິງ 25μL | ເຖິງ 50μL | – |
1) a.The ເອກສຸດທ້າຍຂອງ primer ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນ0.2μM.ສໍາລັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ດີກວ່າ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ primer ສາມາດຖືກປັບປຸງໃຫ້ເຫມາະສົມພາຍໃນຂອບເຂດຂອງ 0.2-1μM.ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ probe ສາມາດຖືກປັບປຸງໃຫ້ເຫມາະສົມພາຍໃນຂອບເຂດຂອງ 0.1-0.3μM.
2.
3) ປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງຕົວຢ່າງມີປະເພດທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະເນື້ອໃນຂອງ inhibitor ແລະສໍາເນົາຈໍານວນຂອງ gene ເປົ້າຫມາຍ.ປະລິມານຕົວຢ່າງຄວນໄດ້ຮັບການພິຈາລະນາໂດຍສະພາບຕົວຈິງ.ເຮັດການເຈືອຈາງຂອງຕົວຢ່າງດ້ວຍນ້ໍາທີ່ບໍ່ມີນິວເຄລຍຫຼື TE Buffer, ຖ້າຈໍາເປັນ.
ປະຕິກິລິຍາ Cລາຍການ
| ຂັ້ນຕອນ PCR ປົກກະຕິ | ຂັ້ນຕອນ PCR ໄວ | ||||||
| ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ. | ເວລາ | ຮອບວຽນ | ຂັ້ນຕອນ | ອຸນຫະພູມ. | ເວລາ | ຮອບວຽນ |
| Reverse Transcription | 50 ℃ | 10-20 ນາທີ | 1 | Reverse Transcription | 50 ℃ | 5 ນາທີ | 1 |
| ໂພລີເມີເຣສ ການເປີດໃຊ້ງານ | 95℃ | 1-5 ນາທີ | 1 | ໂພລີເມີເຣສ ການເປີດໃຊ້ງານ | 95℃ | 30s | 1 |
| ລັກສະນະ | 95℃ | 10-20ວິ | 40-50 | ລັກສະນະ | 95℃ | 1-3ວິ | 40-50 |
| ການຫົດຕົວ ແລະ ສ່ວນຂະຫຍາຍ | 56-64℃ | 20-60s | ການຫົດຕົວ ແລະ ສ່ວນຂະຫຍາຍ | 56-64℃ | 3-20ວິ | ||
ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບ
1.ການກວດຫາຟັງຊັນ: ຄວາມອ່ອນໄຫວ, ຄວາມສະເພາະເຈາະຈົງແລະການເຮັດເລື້ມຄືນຂອງ qPCR.
2.ບໍ່ມີກິດຈະກໍານິວເຄລຍ exogenous: ບໍ່ມີ exogenous endonuclease ແລະມົນລະພິດ exonuclease.
ບັນທຶກ
1.ອັດຕາການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ DNA polymerase ຢ່າງວ່ອງໄວແມ່ນບໍ່ຫນ້ອຍກ່ວາ 1kb/10s.ເຄື່ອງມື PCR ທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີຄວາມໄວຄວາມຮ້ອນແລະຄວາມເຢັນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຮູບແບບການຄວບຄຸມອຸນຫະພູມແລະການນໍາຄວາມຮ້ອນ, ແລະດັ່ງນັ້ນການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນ primer / probe ຂອງທ່ານແລະວິທີການແລ່ນປະສົມປະສານກັບເຄື່ອງມື PCR ໄວສະເພາະຂອງທ່ານແມ່ນຈໍາເປັນ.
2.ຜະລິດຕະພັນນີ້ປະຕິບັດການນໍາໃຊ້ທີ່ກວ້າງຂວາງ, ແລະມັນເຫມາະສົມສໍາລັບການວິນິດໄສໂມເລກຸນຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ.ວິທີການ PCR ສາມຂັ້ນຕອນແມ່ນແນະນໍາສໍາລັບ primers ທີ່ມີອຸນຫະພູມຕ່ໍາ annealing ຫຼືສໍາລັບການຂະຫຍາຍຂອງຊິ້ນຍາວຫຼາຍກວ່າ 200 bp.
3.ເນື່ອງຈາກ amplicons ທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີປະສິດທິພາບການນໍາໃຊ້ທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ dUTP ແລະຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ແຕກຕ່າງກັນຕໍ່ UNG, reagents ຄວນໄດ້ຮັບການເພີ່ມປະສິດທິພາບຖ້າຄວາມອ່ອນໄຫວໃນການກວດສອບຫຼຸດລົງເມື່ອໃຊ້ລະບົບ UNG.ກະລຸນາຕິດຕໍ່ພວກເຮົາສໍາລັບການຊ່ວຍເຫຼືອດ້ານວິຊາການຖ້າຈໍາເປັນ.
4.ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຂະຫຍາຍຜະລິດຕະພັນ PCR, ພື້ນທີ່ທົດລອງທີ່ອຸທິດຕົນແລະ pipette ແມ່ນຕ້ອງການສໍາລັບການຂະຫຍາຍ.ປະຕິບັດດ້ວຍຖົງມືແລະປ່ຽນເລື້ອຍໆແລະບໍ່ເປີດທໍ່ PCR ຫຼັງຈາກຂະຫຍາຍ.
